生物細胞培養遷移侵襲MTT轉染流式分選誘導

一、服務介紹

細胞遷移是指細胞在接收到遷移信號或感受到某些物質的梯度后而產生的移動。細胞遷移為細胞頭部偽足的延伸、新的黏附建立、細胞體尾部收縮在時空上的交替過程。細胞遷移是正常細胞的基本功能之一，是機體正常生長發育的生理過程，也是活細胞普遍存在的一種運動形式。胚胎發育、血管生成、傷口愈合、 免疫反應、炎癥反應、動脈粥樣硬化、癌癥轉移等過程中都涉及細胞遷移。檢測細胞遷移能力的實驗包括劃痕實驗和Transwell實驗。

二、實驗原理

細胞劃痕實驗是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上， 用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中yang區域劃線，去除中yang部分的細胞，然后繼續培養細胞至實驗設定的時間是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法，實驗成本低，可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。Transwell的基本原理是將transwell小室放入培養板中，小室內稱為上室，培養板內稱為下室，上下層培養液以聚碳酸酯膜相隔，上室內添加上層培養液，下室內添加下層培養液。將細胞種在上室內，由于膜有通透性，下層培養液中的成分可以影響到上室內的細胞，從而可以研究下層培養液中的成分對細胞生長、運動等的影響。

三、實驗流程

劃痕實驗

1. 用marker筆在6孔板背后均勻得劃橫線；

2. 在孔中加入細胞；

3. 第二天用槍頭垂至于背后的橫線劃痕；

4. 用PBS洗去處劃下的細胞，培養不同時間，取樣，拍照；

5. 數據處理：每個時間點細胞整體遷移距離=每個時間點距離長度-0時距離；

6. 結果統計分析。 

遷移實驗（cell migration assay）

實驗材料

（1）Transwell chamber: 24-well, 8.0-μm pore membranes (Corning)

（2）細胞培養相關試劑：無血清培養基，10％血清培養基，PBS，0.02％EDTA

（3）固定液：甲醇

（4）染色液：Giemsa染液

（5）封片劑：中性樹膠

（6）其他：小鑷子，棉棒，載玻片，蓋玻片

細胞侵襲實驗 （cell invasion assay）

實驗材料

（1）Matrigel (BD 5mg/ml)，-20℃保存

（2）其余材料同遷移實驗 操作步驟

（3）Matrigel在4℃過夜融化；

（4）用4℃預冷的無血清培養基稀釋Matrigel至終濃度1mg/ml，冰上操作；

（5）在chamber上室底部zhong央垂直加入100μl稀釋后的Matrigel，37℃溫育4－5小時使其干成膠狀；

（6）后續步驟同遷移實驗（1-8）。

注意事項

（1）Matrigel在過高或過低的溫度均易凝固，因此操作所需槍頭和離心管應提前在4℃預冷； （2）鋪膠時保證液面水平，膠的厚度均勻一致，切勿產生氣泡；

（2）其他注意事項同遷移試驗。

Transwell實驗

1. 采用未鋪 Matrigel 膠的 Transwell 小室用于實驗；

2. 制備細胞懸液；

3. 接種細胞；

4. 檢測穿過的細胞數；

5. 結果統計分析。 

注意事項

（1）根據待測細胞體積大小選擇合適孔徑的chamber。常用的為8.0-μm孔徑（如AGS細胞），如果細胞 體積較大可以考慮用10-μm孔徑；

（2）根據待測細胞的遷移能力強弱調整細胞數和遷移時間。常規24-well chamber接種細胞數約為 2≈5×104/well，遷移時間12≈36小時；

（3）由于Corning公司的24-Transwell內含12個獨立的chamber，為了避免操作污染，每次實驗可預先另準備一塊24孔普通培養板（Corning）；

（4）如果細胞遷移能力較弱，下室液體可用3T3細胞無血清培養24小時獲得的上清加50μg/ml FN （Fibronectin），具體可查閱相關文獻；

（5）細胞懸液加入膜zhong央，盡量保證液面水平；

（6）固定染色擦洗時動作小心，避免擦去膜底面的細胞。但一定要充分擦凈膜表面上未遷移的細胞，以 免影響讀數。尤其是膜周邊上可用細牙簽或小鑷子纏上濕棉花擦洗，但要小心避免將膜戳破；

（7）Chamber和膜上都無法標記，操作時應小心避免混淆實驗組和對照組；

（8）充分晾干，避免殘留水分導致鏡下聚焦不一致。

四、服務說明

1. 客戶提供：細胞株(凍存株或培養好的細胞)，所需藥品，藥物處理方式和濃度。

2. 公司提供：基本實驗步驟、圖片、數據分析結果、剩余藥品。

3. 實驗周期：大約2-3周左右，具體需要根據細胞生長情況及實驗內容而定。

服務對象：

1、在職或專職臨床研究生、博士生

● 實驗室條件的不完備

● 文章設計不完善

● 臨床工作繁忙

● 實驗條件摸索不成熟

● 科研時間嚴重不足

● ……

2、地市級三級醫院科室主任、主任醫師、主治醫師等

● 公務繁忙

● 無精力、時間查找文獻

● 沒有時間尋找領域內新熱點

● 科研圈子氛圍不夠濃厚

● 需要更前沿的科研技術應用

● 晉升、晉職需要

● ……

3、繁重科研任務的臨床醫生

● 文章設計不完善

● 科研任務繁重忙不過來

● 臨床工作繁忙，千頭萬緒

● 周圍環境和條件的局限

● 缺少實驗數據

● ……

4、有志于科研的各級醫院臨床醫生/護士

● 奮戰在病房一線

● 時間都給了病人

● 有志于科研

● 心有余而力不足

● ……

整體外包服務介紹：星森林生物提供科研設計咨詢及輔助實施：相關文獻查閱、實驗流程設計、實驗可行性分析、基金標 書撰寫、課題項目申請、整體實驗實施、數據分析與處理、結題報告書寫以及課題相關資料培訓。

● 根據客戶研究方向、基金標書、實驗課題外包目標和要求，實驗預算等設計可操作執行的詳細實驗方 案。

● 根據客戶研究團隊的研究基礎，幫助客戶策劃、設計可執行的研究路線及實驗方案。

● 幫助客戶解決實驗方案中需要突破的重要實驗問題，優化實驗流程。

● 指導客戶篩選和確定實驗方案中所需要的試劑、抗體及相關耗材。

● 根據客戶需求推薦適合客戶的其他增值外包服務。

收費標準/服務周期/提供結果：

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