DB6006 酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒 酯酶系列
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號(hào) DB6006
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 更新時(shí)間 2025/5/9 14:30:20
- 訪問次數(shù) 62
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 100T/48S |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | DB6006 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒 |
酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒說明書
微量法 100T/48S
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：
ACP 在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機(jī)磷酸，常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP 常用于前列腺癌的輔助診斷。
測(cè)定原理：
在酸性環(huán)境中，ACP 催化對(duì)硝基苯磷酸二鈉水解生成 4-硝基ben酚，在 405nm 有特征光吸收；通過測(cè)定 405nm 吸光度增加速率，來計(jì)算ACP 活性。
酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒 酯酶系列
組成：
產(chǎn)品名稱 | DB6006-100T/48S | Storage |
試劑一：液體 | 60ml×2 | 4℃ |
試劑二：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑三：液體 | 50ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
自備儀器和用品：
酶標(biāo)儀、96 孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、10000g 離心 10 min，取上清液待測(cè)。
2. 細(xì)菌或細(xì)胞：按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3 min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血液可直接測(cè)定，或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
測(cè)定：
1. 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 405 nm。
2. 在 EP 管中加入下列試劑
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 | 對(duì)照管 |
樣本 | 10 | 10 | ||
試劑一 | 90 | 990 | ||
試劑二 | 900 | |||
30℃避光保溫 30 min | ||||
試劑三 | 400 | 400 | ||
混勻，吸取 200µL 加入 96 孔板中，405 nm 下測(cè)定各管吸光值。ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
注意：每個(gè)測(cè)定管需做一個(gè)對(duì)照管。
ACP 活性計(jì)算：
標(biāo)準(zhǔn)曲線 y = 7.3336x + 0.0179；R2 = 0.9996；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值ΔA。
1. 血液中ACP 活性計(jì)算
活性單位定義：30℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生 1μmol 4-硝基ben酚定義為 1 個(gè)酶活單位。
ACP 活力(μmol/min/ml)=（ΔA-0.0179）÷7.3336 ×V 反總÷T÷V 樣
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）
2. 組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 ACP 活性計(jì)算
（1） 按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：30℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 μmol 4-硝基ben酚定義為 1 個(gè)酶活單位。
ACP 活力(μmol/min/mg prot)= (ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V 反總÷T÷(V 樣×Cpr)
=0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷Cpr
（2） 按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：30℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 4-硝基ben酚定義為 1 個(gè)酶活單位。
ACP 活力 (μmol/min/g 鮮重)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V 反總÷T÷(W×V 樣÷V 樣總)
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W
（3） 按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
活性單位定義：30℃中每 104 個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 μ mol 4-硝基ben酚定義為 1 個(gè)酶活單位。
ACP 活力(μmol/min/104 cell)=(ΔA-0.0179)÷7.3336 ×V 反總÷T÷（細(xì)胞數(shù)量×V 樣÷V 樣總）
= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷細(xì)胞數(shù)量
V 反總：反應(yīng)體系總體積（ml），1ml； W ：樣品質(zhì)量，g； V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積（ml），
0.01ml；V 樣總：提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間（min），30 min；500：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，500 萬。
注意事項(xiàng)：
ACP 不穩(wěn)定，尤其在 37℃和pH 大于 7 的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng)天準(zhǔn)備；血清樣品中，每毫升血清中加入 10mg 檸檬酸氫二鈉或者 5mg 硫酸氫鈉，使pH 降至 6.5 以下，或 5ml 血清加入 30%醋酸溶液 2～3 滴，置于 4℃可保存 1 周。
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