| 純度 | 99 | 供貨周期 | 一周 |
|---|---|---|---|
| 規格 | 50次 | 貨號 | XY95340P15 |
| 應用領域 | 生物產業 | 主要用途 | 僅用于科研 |
按實蠅屬探針法qPCR試劑盒（不含內參）
Anastrepha Schiner Probe Realtime PCR Kit (without internal control)
按實蠅屬探針法qPCR試劑盒（不含內參）產品及特點：
對按實蠅屬的檢測具有高度特異性，與其他近緣屬或非目標物種的交叉反應率極低，一般小于 1%。通過對多種可能存在干擾的物種進行測試，試劑盒能準確區分按實蠅屬與其他物種，避免假陽性結果。它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經過優化，分析靈敏性高，可以達到 100 拷貝/反應。
3. 提供陽性對照，便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據按實蠅屬DNA 高度保守區設計，不會跟其他的 DNA 發生交叉反應。
5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量時其線性范圍不少于 5 個數量級。
6. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。
7. 本產品只能用于科研。
規格及成分：
成分 | 編號 | 規格 | 包裝材料 |
2×Probe qPCR MasterMix | 試劑一 | 0.5 mL | 0.5 mL 本色蓋 |
熒光 PCR 專用模板稀釋液 | 試劑二 | 1 mL | 1.5 mL 綠色蓋 |
超純水 | 試劑三 | 1 mL | 1.5 mL 藍色蓋 |
按實蠅屬qPCR引物-探針混合液 | 試劑四 | 150 μL | 0.5 mL 棕色管 |
按實蠅屬qPCR陽性對照 (1×10E7 拷貝/μL) | 試劑五 | 50 μL | 0.5 mL 黃色蓋 |
使用手冊 | 一份 | 無 |
運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。
自備試劑 樣品 DNA。
按實蠅屬探針法qPCR試劑盒（不含內參）使用方法：
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E1-10E6 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2，1。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液，最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 6 號管中加入 5μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 5 號管中加入 5μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 4 號管中加入 5μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E4 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個樣品，最好設置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL 上步所得 4 號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的起始體積一樣，以此作為
PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數樣品 DNA 提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
三、Probe qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個
用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6個用于標準曲線。如果做定性分析并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于 PCR 陽性對照（直接用第 6 步第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后最后加）：
成分 | 樣品管 N+2 個 | PCR 陰性 對照 | 標準曲線樣品管 （1-6 管） |
2×Probe qPCR MasterMix | 各 10μL | 10μL | 各 10μL |
按實蠅屬qPCR 引物-探針混合液 | 各 3μL | 3μL | 各 3μL |
N+2 個待測 DNA 樣本 | 各 7μL | 不加 | 不加 |
超純水 | 不加 | 7μL | 不加 |
第 6 步所得標準曲線樣品稀釋液 （1-6 號） | 不加 | 不加 | 各 7μL（1 號樣 到 1 號管，2 號 樣到 2 號管…） |
11. 蓋上蓋子后上機，按下面參數進行 PCR：
過程 | 溫度 | 時間 |
預變性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反應 （45 個循環） | 95℃ | 15 sec |
60℃ | 1 min（采集 FAM 通道的熒 光信號，3`BHQ1 為淬滅基 團） |
四、數據處理
12. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標準曲線上推算出樣品 DNA濃度的 log 值，再推算出其濃度。
13. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照 Ct 必須沒有數值，或者 Ct 值等于或者大于 40。陽性對照必須有熒光對數增長，有典型擴增曲線，Ct 值應該小于 40。對待測樣品，如果其 Ct 小于 40 則為陽性。如果沒有 Ct 值，或大于或等于 40 則為陰性。
僅用于科研，不能用于臨床診斷！所有產品僅供科研使用，不得用于人或動物的治療等任何其他用途，不為任何個人提供產品和服務。以實際收貨產品說明書為準，網站說明書僅供參考。
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