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能夠把這些復雜的評估分析法由繁化簡,并快速完成分析的HPLC色譜柱就是TSKgel FcR-IIIA-NPR。
使用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以直接分離抗體,無需對細胞培養液進行前處理。抗體主要可以分離出3個洗脫峰。已有研究表明,抗體糖鏈末端的半乳糖數量越多,在此色譜柱中的保留能力越強,而保留能力越強的洗脫峰,其ADCC活性就越高。
細胞培養液中單克隆抗體的分離
TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱可以用來測定和監控細胞培養時抗體糖鏈的性狀變化。取不同培養天數的細胞培養液,使用Protein A填料對抗體樣品粗純后,再采用TSKgel FcR-IIIA-NPR色譜柱分析的結果如下圖所示。
抗體細胞培養天數和產生抗體的變化
隨著培養天數的延長,抗體的3個洗脫峰會向前側的洗脫峰位移。雖然延長了細胞培養天數,抗體的產量增加,但是由于受到細胞外糖鏈修飾酶的影響,在色譜柱中的保留能力較高的抗體(多糖的末端半乳糖數量較多的抗體)的洗脫峰反而減少了。因此,可以推定產生的抗體的ADCC活性已經降低。
TSKgel FcR-IIIA-NPR的主要分析用途
①確認不同細胞株(CHO細胞、HEK細胞等)中抗體的性狀變化。
②確認多個細胞株篩選時抗體的性狀變化。
③確認當改變細胞培養基添加劑時抗體的性狀變化
④細胞培養過程中隨培養天數的變化導致抗體性狀變化的確認。
⑤細胞培養規模放大(更改培養方法)時,確認抗體是否發生性狀變化。