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抗平滑肌抗體SMA的檢測方法
抗平滑肌抗體(smoothmuscleantibody,SMA)見于多種自身免疫病。鼠肝、腎、人甲狀腺和血小板等組織與平滑肌的肌動球蛋白具有共同的抗原性。因此,以純化的肌漿球蛋白為抗原可進行沉淀試驗、間接血凝試驗、放射免疫測定和酶免疫技術以檢測SMA。但目前常用的是以平滑肌為抗原基質片的間接免疫熒光法,現介紹如下。
1.平滑肌組織冰凍切片 將大鼠處死,剖腹取胃,切取一塊胃壁組織,洗凈后立即冰凍。用冷凍切片機切成4~6/1m,貼于清潔玻片上,迅速用電風扇吹干。置干燥器內4℃存放,可用1~2個月。
2.操作步驟
(1)將待測血清用0.01mol/L,pH7.4PBS作1:10稀釋,以正常人血清和已知SMA陽性血清同法稀釋作為對照。
(2)將稀釋血清滴加于底物片上,室溫、濕盒內反應30rain。
(3)用PBS流洗除去多余血清后,再于PBS中浸洗3次。分別為5min、5min、10rain(以下同)。
(4)吹干后,滴加zui適工作濃度的熒光素標記抗人IgC。室溫、濕盒內反應30min后按上述方法洗滌。
(5)吹干后,用無自發熒光的緩沖甘油封片,熒光顯微鏡檢查。用鼠胃作底物片時,在粘膜下肌層呈現熒光為陽性。陽性時可將血清再進一步稀釋以測定抗體滴度。
3.臨床意義 SMA主要見于自身免疫性(狼瘡樣)肝炎,可用以同SLE鑒別。原發性膽汁性肝硬化和慢性活動性肝炎時,此抗體檢出率也高,但后者SMA效價甚低。急性病毒性肝炎時SMA陽性率可達80%,多在發病第1周出現。正常人SMA為陰性,中、老年人群中陽性率可達5%左右。
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