20 
 
6、  顯色：為保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液?？稍诩尤氲孜锶?br />液后每隔一段時間觀察一下顯色情況以控制反應時間（比如每隔 10 分鐘）。當肉眼可見標
準品前 3-4 孔有明顯梯度藍色，后 3-4 孔顯色不明顯時，即可加入終止液終止反應，此時
藍色立刻變為黃色。終止液的加入順序應盡量與底物溶液的加入順序相同。 
7、  底物溶液應為淺藍色或無色，如果顏色嚴重變深則必須棄用。底物溶液易受污染，請避光
妥善保存。 
【數據處理】 
可將標準品及樣本值減去 S0 孔數值后繪制曲線，如果設置復孔，則應取其平均值計算。以標
準品的濃度為縱坐標（對數坐標），OD 值為橫坐標（對數坐標），在對數坐標紙上繪出標準曲
線。推薦使用專業制作曲線軟件進行分析，可從我們的下載專業軟件"Curve Expert 1.3"，
并根據提示制作標準曲線。根據樣本 OD 值，由標準曲線查出相應的濃度；或用標準品的濃度
與 OD 值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣本的 OD 值代入方程式，計算出樣本濃度。若樣
本檢測前進行過稀釋，zui后計算時需乘以相應的稀釋倍數，即為樣本的實際濃度。 
【說明】 
1、  本試劑盒僅供研究使用。 
2、  中、英文說明書可能會有不一致之處，請以英文說明書為準。 
3、  本操作說明也適用于 48T 試劑盒。48T 試劑盒中酶標板、標準品、生物素標記抗體及辣根
過氧化物酶標記親和素數量減半。 
4、  不同批號試劑不能混用。不要用其它生產廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 
5、  剛開啟的酶標板孔中可能會含有少許水樣物質，此為正?，F象，不會對實驗結果造成任何
影響19 
 
【操作步驟】 
1、  將各種試劑移至室溫（18-25℃）平衡至少 30 分鐘，按前述方法配制試劑，備用。 
2、  加樣：分別設標準品孔、待測樣本孔。每孔分別加標準品或待測樣本 100μl，輕輕晃動混
勻，覆上板貼，37℃溫育 2 小時。 
3、  棄去液體，甩干，不用洗滌。 
4、  每孔加生物素標記抗體工作液 100μl，覆上新的板貼，37℃溫育 1 小時。 
5、  棄去孔內液體，甩干，洗板 3 次。每次浸泡 2 分鐘，200μl/每孔，甩干。   
6、  每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液 100μl，覆上新的板貼，37℃溫育 1 小時。 
7、  棄去孔內液體，甩干，洗板 5 次。每次浸泡 2 分鐘，200μl/每孔，甩干。 
8、  依序每孔加底物溶液 90μl，37℃避光顯色 15-30 分鐘。 
9、  依序每孔加終止溶液 50μl，終止反應。 
10、 在反應終止后 5 分鐘內用酶標儀在 450nm 波長依序測量各孔的光密度（OD 值）。   
【操作要點】 
1、  為保證檢測結果的準確性，建議標準品及樣本均設雙孔測定。每次檢測均需做標準曲線。 
2、  如標本中待測物質含量過高，請先用樣本稀釋液進行稀釋，以使樣本符合試劑盒的檢測范
圍，zui后計算時再乘以相應的稀釋倍數。 
3、  加樣：加樣時，請使用一次性的潔凈吸頭，避免交叉污染。加樣時應盡量輕緩，避免起泡，
將樣本加于酶標板孔底部，切勿沿孔壁加樣。一次加樣時間控制在 10 分鐘內，如標
本數量多，推薦使用排槍加樣。 
4、  溫育：為防止樣本蒸發或污染，溫育過程中酶標板必須覆上板貼，實驗過程中酶標板應避
免處于干燥的狀態。溫育過程中應隨時觀察溫箱溫度是否恒定于 37℃，及時調整。溫育
過程中，溫箱不易開啟太多次，以免影響溫度平衡。 
5、  洗滌：洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。 
(1)  手工洗板方法：吸去（不可觸及孔壁和孔底）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪
墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液按 200μl/孔注入孔內，
浸泡 2 分鐘。根據操作步驟中所述，重復此過程數次。 
(2)  自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 18 
 
3、  生物素標記抗體工作液 
    生物素標記抗體液按1:100倍用生物素標記抗體稀釋液進行稀釋。如10μl生物素標記抗體加
990μl生物素標記抗體稀釋液，輕輕混勻，在臨用*分鐘內配妥。 
4、  辣根過氧化物酶標記親和素工作液 
    辣根過氧化物酶標記親和素按1:100倍用辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液進行稀釋。如
10μl辣根過氧化物酶標記親和素加990μl辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液，輕輕混勻，在臨用
*分鐘內配妥。 
【重要提示】    
1、  實驗開始前，請提前配置好所有試劑。試劑或樣本稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起
泡。 
2、  用戶在初次使用試劑盒時，應將各種試劑管離心數分鐘，以便管蓋和管壁上的液體集中到
管底。 
3、  在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應的稀釋液配制，不能混淆。 
4、  因實際裝量多于標示裝量，配制工作試劑請用的計量工具（移液槍或量筒等）量取，
切勿不經量取直接使用。 
5、  標準品、生物素標記抗體工作液、辣根過氧化物酶標記親和素工作液稀釋前根據預先計算
好的每次實驗所需的總量配制，實際配制時應多配制 0.1-0.4ml。請勿重復使用已稀釋過
的標準品、生物素標記抗體工作液、或辣根過氧化物酶標記親和素工作液。 
6、  標準品的稀釋請勿于板中進行，標準品應于臨用前 15 分鐘內配制。為保證實驗有效性，
建議每次實驗使用新的標準品。若保存得當，溶解后的標準品 S7 可在 2-8℃保存，7 天內
使用有效。 
 
 
 
 
 17 
 
或將上清分裝保存于-20°C 或-80°C。解凍后的樣品應再次離心，然后檢測。避免反復凍
融。 
注：標本溶血會影響zui后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。 
【試劑配制】 
1、  標準品 
(1)  從試劑盒中取出一支標準品，于 6000-10000rpm 離心 30 秒。用 1ml 樣本稀釋液溶解，并
用槍頭對準凍存管底部反復吸打 5 次以助溶解，充分混勻得到標準品 S7，放置備用。 
(2)  取 7 個 1.5  ml 離心管(S0-S6)依次排列，各加入 250µl 樣本稀釋液。吸取 250µl 標準品
S7 到*個離心管中(S6)，輕輕吹打混勻。從 S6 中吸取 250µl 到第二個 EP 管中(S5)，
輕輕吹打混勻。以此類推進行標準品的倍比稀釋。S0 為樣本稀釋液。 
 
 
 
 
 
 
 
【標準品濃度】 
編號  S7  S6  S5  S4  S3  S2  S1  S0 
pg/ml  4000  2000  1000  500  250  125  62.5  0 
 
2、  洗液工作液 
濃洗滌液按1:25倍用去離子水進行稀釋。例如用量筒量取240ml去離子水，倒入燒杯或其
他潔凈容器中，再量取10ml濃洗滌液，均勻加入，攪拌混勻，在臨用前配妥。濃洗滌液低溫保
存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 
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【存儲條件及有效期】 
未開封試劑盒 
試劑盒避光保存于2-8℃。有效期為六個月。 
請在試劑盒標注的有效日期內使用。 
開封試劑盒 
預包被的酶標板 
酶標板打開后應置有干燥劑的鋁箔袋中置
于 2-8℃密封防潮保存。有效期內 2-8℃條
件下zui多可保存一個月。 
標準品 
有效期內2-8℃條件下zui多可保存一個月。
若近期不使用，保存在-20°C。 
生物素標記抗體 
辣根過氧化物酶標記親和素 
生物素標記抗體稀釋液 
有效期內2-8℃條件下zui多可保存一個月。 
辣根過氧化物酶標記親和素
稀釋液 
樣本稀釋液 
濃洗滌液 
底物溶液 
終止液 
【所需試劑和器材】 
標準規格酶標儀；高速離心機；電熱恒溫培養箱；干凈的試管和離心管；容量瓶； 
系列可調節移液器及吸頭；多通道移液器；蒸餾水 等 
【樣本采集及保存】 
1、  血清：全血標本請于室溫放置 2 小時或 4°C 過一夜后于 2 - 8°C 1000 x g 離心 15 分鐘，取
上清即可立即檢測；或進行分裝，并將標本放于-20°C 或-80°C 保存，但應避免反復凍融。
解凍后的樣品應再次離心，然后檢測。 
2、  血漿：可用 EDTA 或肝素作為抗凝劑，標本采集后 30 分鐘內于 2 - 8°C 1000 x g 離心 15
分鐘，取上清即可立即檢測；或進行分裝，并將標本放于-20°C 或-80°C 保存，但應避免
反復凍融。解凍后的樣品應再次離心，然后檢測。 
3、  組織裂解液：取 100mg 組織，用 1X PBS 洗去血污。剪成小塊放入組織研磨器（勻漿管）
中，加入 1 ml 1X PBS，制成勻漿，然后置于-20°C 過一夜。經過反復凍融 2 次處理破壞細
胞膜后，將組織勻漿于 2 - 8°C 5000 x g 離心 5 分鐘取上清。取適量上清液立即進行實驗，15 
 
人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體 1 (sLOX-1) 
酶聯免疫試劑盒使用說明書 
【產品編號】CSB-E13567h   
【預期應用】ELISA 法定量測定人血清、血漿、組織裂解液中 sLOX-1 含量。 
【產品性能指標】 
1、  檢測范圍：62.5 pg/ml-4000 pg/ml 
2、  靈敏度：15.6 pg/ml 
3、  精密度：批內差 CV%<8%，批間差 CV%<10% 
4、  特異性：本試劑盒特異性檢測人 sLOX-1，且與其他相關蛋白無交叉反應。 
【實驗原理】 
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗 sLOX-1 抗體的微孔中依次加入標本或標
準品、生物素化的抗 sLOX-1 抗體、HRP 標記的親和素，經過*洗滌后用底物 TMB 顯色。
TMB 在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣
本中的 sLOX-1 呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣本濃度。 
【試劑盒組成成分】 
組份  96T 
酶標板  (Assay plate)  12 條×8 孔 
標準品  (Standard)  2 瓶  (凍干品) 
生物素標記抗體  (Biotin-antibody)    1 x 120 μl/瓶  (100×) 
辣根過氧化物酶標記親和素  (HRP-avidin)    1 x 120 μl/瓶  (100×) 
生物素標記抗體稀釋液  (Biotin-antibody Diluent)  1 x 15 ml/瓶 
辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液  (HRP-avidin Diluent)  1 x 15 ml/瓶 
樣本稀釋液  (Sample Diluent)  1 x 50 ml/瓶 
濃洗滌液  (Wash Buffer)    1 x 20 ml/瓶  (25×) 
底物溶液  (TMB Substrate)  1 x 10 ml/瓶 
終止液  (Stop Solution)  1 x 10 ml/瓶 
板貼  4