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 暗視野顯微鏡又被稱作暗場顯微鏡，是一種通過觀察樣品受側向光照射時所產生的散射光來分辨樣品細節的顯微鏡。 暗視野顯微鏡適用于檢查未染色標本的形態及其運動能力。

原理和結構特點：

暗視野顯微鏡和普通的明視野顯微鏡區別在于它們的聚光器有所不同。暗視野顯微鏡裝有一個*遮暗的聚光器，使光線不能通過聚光器，而只能從聚光器四周及未遮暗的部位斜射到載玻片的標本上。同時因光線是斜射的，不能進入物鏡，而使得觀察的視野也是暗的，而聚光器斜射到菌體上的光線，則因光的散射作用而使菌體發亮，再反射至物鏡內，這樣在顯微鏡中則可見到暗視野中明亮的影像。

操作方法：

1）使用研究級暗視野顯微鏡，或將普通光學顯微鏡上的聚光器取下來，裝上暗場聚光器；

2）不論使用的是干燥物鏡還是油浸物鏡，在進行鏡檢時都應在聚光器的上透鏡上，加上一滴香柏油；

3）將制作好的細菌懸滴標本片放置于載物臺上，然后上升聚光器至頂部，使油與載玻片相接觸；

4）放大光源；

5）進行聚光器光軸調節及調焦；首先用10×物鏡找到被檢物像，然后調小聚光器虹彩光圈，直至可在視野中看到視場光闌的輪廓，再上下細致調整聚光器，這樣會使視場光闌的影像變得更為清晰，同時，如視場光闌不在場*，則可利用聚光器外側的兩個調節鈕進行調整，當亮光點到達場*后，再將其調大，方可進行觀察。

注意事項：

1）暗視野觀察所用物鏡的數值孔徑一般適宜在1.00—1.25左右，建議使用帶視場光闌的物鏡，通過隨意轉動物鏡中部的調節環，可輕松改變數值孔徑的大小。

2）更要求使用的載玻片和蓋玻片必須無劃痕、無灰塵，且物鏡前透鏡也必須潔凈無塵。同時載玻片與蓋玻片的厚度也應符合標準。

3）鏡檢時室內的光線應較暗，如果達不到這樣的條件，也應盡量使用遮光裝置，以更好的阻止目鏡周圍有光線射入。

4）在進行油鏡的鏡檢時，由于油內的雜質和氣泡產生的漫反射，可能會影響視場的鏡檢效果，所以必須盡量先清除掉油內的雜質和氣泡等。

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