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上海慧穎生物科技有限公司

葡聚糖凝膠使用說明

時間:2015-3-6閱讀:2927

葡聚糖凝膠使用說明   


化學和物理性質    葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。   


葡聚糖凝膠有不同的粒度。    超細級的葡聚糖凝膠是用于需要*分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級也可用于批量工藝。   


化學穩定性    葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩定的,在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。  


 物理穩定性    葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。干態的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯度。   


產品說明:

     

產品名稱

分離范圍

應用

葡聚糖凝膠G-10

<700

緩沖液交換、脫鹽、分離小分子、去除小分子

葡聚糖凝膠G-15

<1500

緩沖液交換、脫鹽、分離小分子、去除小分子

葡聚糖凝膠G-25

1000-5000

工業上脫鹽及交換緩沖液

葡聚糖凝膠G-50

1000-30000

多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定

葡聚糖凝膠G-75

2000-70000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定

葡聚糖凝膠G-100

2000-120000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定

葡聚糖凝膠G-150

5000-300000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定

葡聚糖凝膠G-200

5000-600000

蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數測定



使用方法:   


1. 乙醇浸泡:    在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干;   

2. 無鹽水浸泡:    室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的*溶脹,然后;   

3. 鹽酸浸泡:   在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性;   


4. 將溶脹好的凝膠脫氣后(真空抽濾或超聲波)根據裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層;   


5. 上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩為止(流出液的PH值等于上柱的BufferPH值);   


6. 凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為51即可;   


7. 洗脫方法:    可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以*分離純化;   


8. 在位清洗(CIP    凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。    備注: 其它規格葡聚糖凝膠處理方法類似。

  

PS G-75可以重復使用,一般幾十次都沒問題的。保質期2年。    

未使用,室溫保存即可。

使用后保存方法如下:凝膠層析的載體不會與被分離的物質發生任何作用,因此凝膠柱在層析分離后稍加平衡即可進行下一次的分離操作。但使用多次后,由于床體積變小,流動速率降低或雜質污染等原因,使分離效果受到影響。此時對凝膠柱需進行再生處理,其方法是:先用水反復進行逆向沖洗,再用緩沖溶液平衡,即可進行下一次分離。     


對使用過的凝膠,若短時間保存,只要反復洗滌除去蛋白質等雜質,加入適量防腐劑即可;若長期保存,則需將凝膠從柱中取出,進行洗滌、脫水和干燥等處理后,裝瓶保存。



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