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流式細胞儀的調試和校準

2017-12-7  閱讀(3821)

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流式細胞儀是一種常用的流量測量儀器,可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量。今天我們主要來介紹一下流式細胞儀的調試和校準方法,希望可以幫助用戶更好的應用產品。

流式細胞儀的調試和校準

流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調試,以保證工作的可靠性和*性。調試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區的光路等。

激光強度:除調整反射鏡的角度以調整到所需波長的激光出光外,還要結合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為zui大。

液流速度:可通過操作臺數字顯示監督,調節 氣體壓力大小以獲得穩定的液流速度。

測量區光路調節 :這是調試工作的關鍵。需要保證在測量區的液流、激光束、90散射測量光電系統垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。

流式細胞術中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調整和定量標度。標準樣品應該穩定,有形成份形狀應是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作,或標有熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,zui后經PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發熒光。

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