高效液相色譜系統(tǒng)的有效運行取決于流動相和樣品不受化學(xué)雜質(zhì)或固體懸浮液的影響。HPLC流動相處理和使用中的注意事項討論了流動相制備和使用過程中應(yīng)采取的措施。樣品過濾的重要性討論了清潔樣品進樣的好處。
高效液相色譜柱是高效液相色譜系統(tǒng)的關(guān)鍵部件，需要小心處理和保護。經(jīng)常更換色譜柱是很昂貴的，因此您的目標應(yīng)該是*大限度地延長色譜柱的使用壽命，以便每次都能獲得所需的準確度和一致性結(jié)果。
由于雜質(zhì)和懸浮液的逐漸累積，HPLC柱的色譜行為在使用過程中開始下降。流動相或樣品中大于2μm的顆粒開始沉積在柱的入口玻璃料上，從而干擾流動的均勻性。較小的顆粒會導(dǎo)致背壓增加，因此它們開始阻塞固定相的流動路徑。
污染物的性質(zhì)
·反相分離中高度保留的化合物，如脂肪酸
·不可逆保留的化合物，如殘留的蛋白質(zhì)，在樣品提取時未完·全去除。強烈建議在HPLC分析之前對生物液體中的蛋白質(zhì)進行脫蛋白處理。
·顆粒雜質(zhì)可能是由于樣品未過濾，系統(tǒng)部件（如泵或噴油器中的密封件）磨損而釋放的顆粒。
·柱內(nèi)殘留緩沖液干燥產(chǎn)生的結(jié)晶沉積物。使用后用HPLC級水或緩沖溶液清洗色譜柱可防止此類鹽沉積的形成。
什么是保護柱？
保護柱是安裝在進樣器和分析柱之間的保護柱或小柱。 它用于去除到達分析柱的雜質(zhì)和懸浮固體。 通常它具有大約 2 厘米的長度和 4.6 毫米的內(nèi)徑。 保護柱填充有約 40 μm 大小的片狀顆粒，壓降可忽略不計。
護柱的理想特性
·保護柱最好具有與分析柱相同的填料，以消除分離并發(fā)癥
·護柱的內(nèi)部ID應(yīng)與分析柱相當(dāng)，以將背壓降至最·低。較短的保護柱長度是可取的，但其長度應(yīng)足以防止強烈保留的化合物到達主柱
·面向注入器的熔塊應(yīng)可移除，以便通過移除約2 mm的材料并填充新材料進行清潔
·與可重新填充的防護柱相比，一次性盒式防護柱使用方便且經(jīng)濟。
需要定期更換保護柱，但通過觀察色譜行為的變化，如背壓增加、峰加寬和峰保留時間的變化，需要進行中間更換。然而，變化頻率可根據(jù)樣品的化學(xué)成分、高保留或不可逆保留成分的存在、進樣量或進樣次數(shù)來確定。
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