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您的方法中的分裂峰是否讓您徹夜難眠？您將在下面找到一些可能導致這些分裂峰的原因，以及如何解決問題。

有幾個問題需要回答，以確定從哪里開始調查峰分裂的根本原因。方法中的所有峰都分裂還是只有一個或幾個峰分裂？您是否總是在您的方法中觀察到分裂峰，或者它們似乎突然開始發生？首先弄清楚這些答案可以讓您知道從哪里開始進行故障排除。

如果只有*早的洗脫峰分裂，這可歸因于稀釋劑不匹配。這可以通過使用較弱的溶劑稀釋樣品或使樣品稀釋劑與起始流動相條件相匹配來解決。這也可以通過注入更少量或使用更大的色譜柱來解決。請參見下面圖 1 和圖 2 中的不匹配稀釋劑示例。

圖 1：使用甲醇作為稀釋劑分析 2 種酰基肉堿的方法條件和色譜圖。

圖 2：使用流動相 A 作為稀釋劑分析 2 種酰基肉堿的方法條件和色譜圖。

如果方法中只有一個或幾個峰發生分裂，則要排除的下一個問題是它實際上是一個峰分裂成兩個，還是它們是共流出峰。可能存在與您的分析物共流出的基質干擾。在這種情況下，請嘗試注入空白基質樣品以排除任何共流出問題。另一個原因可能是樣品的濃度或進樣量過高，這可能會導致樣品過載，從而導致分離峰。嘗試注入較小的樣品體積，如果您注意到仍然有兩個不同的峰，那么可能是時候回顧一下您的方法并努力調整條件以提高選擇性。  

另一個可能導致您的方法出現分裂峰的變量是流動相的 pH 值是否太接近分析物的 pKa。一般的經驗法則是根據分析物的 pKa 調整流動相 2 個或更多單位的 pH 值。分裂峰可能是由分析物在特定 pH 下的電離狀態引起的。如果 pH 值與分析物的 pKa 太接近，則會出現多種電離狀態，從而導致分析物出現多個峰。在這些情況下，嘗試將您的流動相 pH 值調整 +/- 2 并運行幾個樣品，看看這是否有助于峰分裂。

不溶性是另一個可能導致方法中峰分裂的因素。為避免這種情況，重要的是要確保樣品在稀釋劑和流動相中都可溶。如果它不溶于其中之一，它可能會導致分裂或扭曲的峰。

如果分裂峰在您的方法中通常不是問題，而您突然注意到分裂峰，這可能表明存在幾個問題。污染是導致分裂峰的另一個因素。就流動相而言，使用新鮮溶液也很重要，如果使用 MS 檢測，則應使用 LC-MS 級溶劑。僅使用制造商在色譜柱上推薦的流動相，并在適當的條件下清洗和儲存也很重要。