土壤總磷/有機磷/無機磷含量檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
規格: 50T/24S
試劑組成和配制：
試劑一：液體 50mL×1
瓶，4℃保存。臨用前用蒸餾水稀釋 10 倍后再用。
試劑二：液體 11mL×1
瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 20 mL 蒸餾水，充分溶解后加入 10 mL
試劑二，混勻。
標準品：液體 1mL×1 支，40 μg/mL 無機磷標準品，4℃保存。
產品說明：
土壤總磷包括有機磷和無機磷，其中無機磷能夠直接被植物利用。土壤有機磷經過礦化分解而
轉化為無機磷。同時測定土壤總磷、有機磷和無機磷，可以全面反映土壤磷營養狀況。
利用鉬藍法定磷。取一份土樣，通過浸提法測定土壤無機磷含量；另外取一份土樣，經高溫灼
燒后，土壤有機磷轉化為無機磷，測得土壤總磷含量；總磷含量減去無機磷含量，即可計算出有機
磷含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調式水浴鍋，分析天平、可調式移液器、550℃高溫電爐，
1mL 玻璃比色皿、蒸餾水、100 目篩子（可更小）。
操作步驟：
一、土壤不同形態磷提取：
1.
無機磷：稱取通過 100 目篩子的風干土樣 0.1g，轉移到
10 mL 離心管，加入 10mL 試劑一，
震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃離心
10min，取上清液一，用于無機磷含量
測定。
2.
總磷提取：取通過 100 目篩子的風干土樣，550℃灼燒 1h，冷卻后稱取約 0.1g，轉移到 10 mL
離心管，加入 10mL 試劑一，震蕩混勻，然后置于 45℃水浴 1h，8000rpm，25℃，離心 10min，
取上清液二，用于總磷含量測定。
二、測定步驟：
1.
分光光度計預熱 30 min，調節波長到 660 nm，蒸餾水調零。
2.
打開水浴鍋，調節溫度到 40℃。
3.
空白管：取 EP 管，依次加入 500µL 蒸餾水，500μL 試劑三，混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，
室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為 A 空白管。
4.
標準管：取 EP 管，依次加入 50µL 標準液，450µL 蒸餾水，500μL 試劑三，混勻后置于 40℃第 2頁，共 2 頁
水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，記為
A 標準管。
5. 測定管：取
EP 管，依次加入 50µL 上清液一或者上清液二，450µL
蒸餾水，500μL 試劑三，
混勻后置于
40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm
測定吸光度，記為 A 測
定管。
注意：空白管和標準管只需測定一次。
三、土壤磷含量計算：
1.
土壤無機磷含量（μg /g）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A
標準管－A 空白管)]×V
總÷W =400×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W
C 標準液：40μg/ml；W：土壤樣品質量，g；V 總：上清液一總體積，10 mL。
2.土壤總磷含量（μg /g）=[C 標準液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)]×V 總÷
W=400×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A
空白管)÷W
C
標準液：40μg/ml；W：土壤樣品質量，g；V
總：上清液二總體積，10 mL。
3.
土壤有機磷（μg /g）=土壤總磷-土壤無機磷
注意事項：
試劑三配制過程中，可能會產生黑色固體，其不影響結果，注意吸取時不要將黑色固體吸入。
