1882年3月24日是著名德國科學家羅伯特·科赫在柏林宣讀發(fā)現(xiàn)結核菌的日子。在1982年紀念科赫發(fā)現(xiàn)結核菌100周年時，世界衛(wèi)生組織(WHO)和防癆和肺病聯(lián)合會(IUATLD)共同倡議將3月24日作為“世界防治結核病日”，以提醒公眾加深對結核病的認識。2021年3月24日是第26個世界防治結核病日，今年我國的宣傳主題是：“終結結核流行，自由健康呼吸”

結核病(Tuberculosis，TB)是常見并可致命的一種傳染病，由結核分枝桿菌感染引起，主要通過空氣傳播。結核病困擾人類已經(jīng)有成千上萬年的歷史。科學家們在9000年前的以色列人遺骸和2000年前的埃及木乃伊上都發(fā)現(xiàn)了肺結核感染的痕跡。如今，這種病每年仍導致大概150萬人死亡，多于其他任何一種傳染病，是目前面臨的重大公共衛(wèi)生問題之一。

2020年10月14日，世界衛(wèi)生組織（WHO）正式發(fā)布了結核病年度報告。報告估計過去一年新發(fā)結核病患者仍有1000萬，其中32%為女性，12%為15歲以下兒童，因結核死亡患者約141萬。大多數(shù)結核病病例集中在東南亞（44%）、非洲（25%）和西太平洋（18%），而東地中海（8.2%）、美洲（2.9%）和歐洲（2.5%）占比較小；三分之二的結核患者來自8個國家：印度（26%）、印度尼西亞（8.5%）、中國（8.4%）、菲律賓（6.0%）、巴基斯坦（5.7%）、尼日利亞（4.4%）、孟加拉國（3.6%）和南非（3.6%）。中國新發(fā)患者數(shù)約83.3萬，僅次于印度和印度尼西亞。防治肺結核的工作依舊嚴峻。

早期快速確診及治療是控制結核病傳播的關鍵，目前肺結核的診斷主要依靠患者癥狀、胸部影像學檢查及痰涂片抗酸染色和痰MTB培養(yǎng)。然而，肺結核患者癥狀及影像學檢查往往缺乏特異性，痰涂片抗酸染色法檢查敏感性和特異性都很低，很多時候會導致漏診；痰MTB培養(yǎng)耗時長，以上檢測手段難以滿足早期快速診斷肺結核的要求。隨著分子生物學的飛速發(fā)展，越來越多的分子診斷方法被應用于結核病臨床診斷。2017 年我國頒布的《“十三五”結核病防治規(guī)劃》中明確提出分子生物學檢驗陽性可以輔助確診肺結核。

分子生物學診斷

結核病分子生物學診斷方法主要分為：

①實時熒光定量PCR 檢測

②恒溫擴增檢測

③基因探針（基因芯片）檢測

實時熒光定量PCR

通過監(jiān)測熒光信號實時檢測結核菌的特異基因及耐藥相關基因 單核苷酸多態(tài)性（SNP） 位點，可以在 2 小時內(nèi)檢測樣本中是否存在結核分枝桿菌以及是否耐藥，是目前結核病分子診斷技術之一，并且該方法操作簡便、檢測準確性高（敏感度 88％，特異度 99％）、污染幾率小，不足之處是價格昂貴，并且目前僅能針對利福平耐藥相關 rpoB 做出檢測，能夠檢測的耐藥相關基因及位點較少。2010年12月WHO批準了利福平耐藥實時熒光定量核酸擴增技術( Xpert MTB /RIF)的應用，該技術被WHO譽為結核病診斷中革命性的突破。

恒溫擴增

利用鏈置換型 DNA 聚合酶（Bst DNA polymerase）在恒溫條件下對目標基因進行快速擴增反應。該方法可用于涂陰結核病的診斷，檢測靈敏度在 50％～80％之間，并且恒溫診斷方法對儀器的依賴程度小，試劑成本低，非常適用于基層結核病的檢測，代表方法：loop-mediated isothermal amplification (TB-LAMP; Eiken Chemical, Tokyo, Japan)。但是該方法容易產(chǎn)生假陽性結果，實驗室檢測時需要注意分子氣溶膠的產(chǎn)生。

基因探針（基因芯片）檢測

分為擴增和檢測兩步，首先對特異的片段進行 PCR 擴增，然后檢測擴增后片段是否與結核分枝桿菌（MTB）檢測探針或者耐藥檢測探針結合。其特點是可以區(qū)分結核病與非結核病，檢測通量高，并且可以在 5～8 小時內(nèi)檢測是否為耐多藥結核病（MDR-TB），代表方法： line-probe assays (LPAs; GenoType® MTBDRplus and GenoType® MTBDRsl, HAIN Lifescience, Nehren, Germany; NTM+MDRTB Detection Kit, NIPRO Corporation, Osaka, Japan)，該方法特異度及靈敏度較高（80％～90％）。其缺點是需要開蓋操作，容易產(chǎn)生污染，并且操作繁瑣，價格昂貴。

未來展望

過去幾十年，為預防和治療結核病及耐藥性結核病，進行了大量努力。結核病的基礎研究、診斷方法和治療手段都取得了巨大進步。通過此次我們也認識到分子診斷技術推廣的必要性，隨著人工智能和實驗室自動化技術的快速發(fā)展，全面實現(xiàn)肺結核自動化分子診斷將是未來的一大趨勢。

參考文獻：

[1]:World Health Organization 2020.

[2]:Dorman Se,et al.Performance of Xpert MTB/RIF Ultra and Xpert MTB/RIF for the Diagnosis of Tuberculosis through Testing of Formalin-fixed Paraffin-embedded Tissues.2019,32,(12).

[3]:劉權賢等.TB-LAMP、Xpert MTB/RIF及羅氏固體培養(yǎng)在肺結核診斷中的比較.2018,31.（12）.