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PCR試劑 Pfu DNA Polymerase
貨號：PC1300
規格 ：500U/1000U
濃度 ：5U/ul
保存 ：-20℃保存, 有效期少一年。
產品簡介 ：
Pfu DNA Ploymerase 是從克隆有 Pyrococcus furiosis DNA Ploymerase 基因的大腸桿菌中表達并經過柱純化分離出來的重組蛋白，其分子量為 90kD。由于 Pfu 酶具有 3’→5’核酸外切酶活性，它能糾正 DNA 擴增過程中產生的錯配，而傳統的 Taq 酶卻不能，其它耐熱 DNA Polymerase 如 Vent、Deep Vent、Tli、UITma 等雖具有校正功能， 但 Pfu 酶是目前已發現的所有耐熱 DNA Polymerase 中出錯率低的。 Pfu 酶無 5’→3’核酸外切酶活性，PCR 反應中的延伸速度一般為 0.5-1kb/min，比 Taq 酶要低。Pfu 酶比 Taq 酶熱穩定性更好，95 1 ℃ 小時仍保持90%以上的活性，對于 GC 含量很高的模板，變性溫度可以提高到 98℃而不影響其活性。Pfu 酶的 PCR 產物為平末端，可加 A 處理再與 T-載體連接或使用平末端克隆載體。
活性定義 ：
1 單位(U) Pfu DNA Polymerase 活力定義為在 74℃，30 分鐘內，以活性化的大馬哈魚精子 DNA 作為模板/引物，將 10 nmol 脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。
質量控制 ：
SDS-PAGE 檢測 Pfu DNA Polymerase 純度大于 99%； 經檢測無外源核酸酶活性； PCR 方法檢測無宿主殘余DNA；能有效地擴增人類基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無明顯活性改變。
酶貯存緩沖液 ：
50mM Tris-HCl (pH 8.2); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50% glycerol；其他成份。
適用范圍 ：
用于 DNA 的高保真擴增，如基因表達克隆、基因定點突變、細胞內基因點突變的分析（SNP）和末端補平等。
建議 PCR 體系（以 50µl 反應體系為例）
Template <0.5µg
上游引物（10µM） 1µl
下游引物（10µM） 1µl
10×Buffer（含 Mg 2+ ） 5µl
dNTP（各 2.5mM） 4µl
Pfu DNA Polymerase 0.5-1µl
ddH2O up to 50µl
注意事項 ：
1、PCR 反應體系加樣時，后一步加入 Pfu DNA Ploymerase，整個過程宜在冰上操作。
2、取 Pfu DNA Ploymerase 做 PCR 反應時，請用高壓滅菌處理過的吸頭。
3、10×Pfu Buffer 中含 20 mM Mg 2+ ，如 PCR 反應需要較高 Mg 2+ 濃度，請另行加入。
4、 用Pfu酶擴增時， 引物的純度要求較高， 引物長度大于18個堿基， Tm值在55-80℃之間， 引物濃度在0.1-0.5uM之間，比 Taq 酶略高。
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