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單糖分析指南，Ludger可以提供單糖分析服務
點擊次數：3179 發布時間：2015-1-30
單糖分析指南如下，Ludger公司可以提供單糖分析的技術服務
單糖分析是監管機構在生物制藥表征的產品標準規格指南中提出的一個要求。單糖分析可用于在藥物開發的各個階段，作為確定糖基化（N-連接和/或O-連接）類型和糖基化程度的方法。它也可以用于證明在實際生產過程中多批次之間大量釋放的質量控制檢測的一致性。
較廣泛使用的單糖分析方法如下：
1. 通過輕度酸水解放糖蛋白上的單糖。
2. 釋放的單糖用2-氨基苯甲酸（2-AA）進行熒光標記。
3. 用HPLC或UHPLC柱對2-AA標記的單糖進行定量分析。
LudgerTag?單糖釋放和標記試劑盒（貨號：LT-MONO-96）可以提供所有需要的從糖蛋白釋放中性和氨基單糖以及2-AA標記的功能。該試劑盒包含有96個糖蛋白樣品（可用于每個大約50 μg的糖蛋白）的試劑和材料。
它包括含6個單糖單獨混合的定量標準品。該單獨混合標準品能校準試驗儀器，從而可以定量的確定糖蛋白的單糖組成。
我們建議用五點校準曲線為此標準品進行校準，這在試劑盒說明書中有詳細說明。
木糖是一種通常存在于植物和昆蟲的單糖，但不是哺乳動物或酵母表達載體的單糖。此試劑盒也包含了木糖。它可以被用來作為內參使用（即在標記之前加入到每個樣品）。這樣能補償樣品在處理過程中發生的任何移液或樣品制備誤差的損失。我們還建議純化糖肽標準品，是LudgerBioQuant?*量化的標準品，作為陽性對照。
這個定量標準品（貨號：BQ-GPEP-A2G2S2-10U）是一個復雜的N-連接雙觸角聚糖，終止于兩個N-乙酰氨基酸。使用此標準品將可以檢查聚糖的釋放、標記和回收的有效性，并可以增加您的單糖測定準確性。
根據您實驗室的需求，我們提供兩種色譜柱對標記的單糖進行分析。如果使用液相色譜法（HPLC），我們建議使用LudgerSep?R2柱（貨號: LS-R2-4.6×150），它能有效的分離在大部分N-連接和O-連接聚糖中存在的七個主要單糖。如果使用超液相色譜（UHPLC），我們建議使用LudgerSep?UR2柱（貨號: LS-UR2-2.1x50），它可在8分鐘內分離每個樣本。參見圖1：
圖1：用LudgerSep UR2 UHPLC色譜柱（貨號: LS-UR2-2.1x50）分離的2-AA標記單糖標準品。以下單糖都在8分鐘內出峰：氨基葡萄糖（GlcN），氨基半乳糖（GalN），半乳糖（Gal），甘露糖（Man），葡萄糖（Glc），木糖（Xyl）和巖藻糖（Fuc）
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商品型號 | 英文品名 | 中文品名 | 包裝 |
LT-MONO-96 | Monosaccharide Release & Labeling Kit | 單糖釋放和標記試劑盒 | 2 Reaction Sets |
LS-R2-4.6x150 | LudgerSep R2HPLC Column | R2 HPLC 色譜柱 | 4.6 x 150 mm |
LS-UR2-2.1x50 | LudgerSep uR2UHPLC Column-monosaccharide | uR2 UHPLC 色譜柱-單糖 | 2.1x 50 mm |
LS-R-BPTX10 | LudgerSepR BPT Solvent | 10倍BPT溶液 | 50ml |
CM-MONOMIX-10 | Mix of six monosaccharide quantitative standards (glucosamine, galactosamine, galactose, mannose, glucose/dextroseand fucose ) | 6個單糖混標準品 (葡萄糖胺, 半乳糖胺, 半乳糖, 甘露糖,葡萄糖和巖藻糖 ) | 10 nmol |
BQ-GPEP-A2G2S2 | A2G2S2 glycopeptide standard | A2G2S2 糖肽標準品（用于單糖釋放和標記過程） | 10 μg |