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商品屬性：

背景：

Transferrin (Tf),is an iron transporter, which is mainly biosynthesized in the liver, and it can also be biosynthesized in the brain; i.e., by oligodendrocytes and the choroid plexus, cerebrospinal fluid (CSF) producing tissue. The CSF contains two Tf isoforms, brain-type Tf and serum-type Tf, which differ in their glycan structures. Brain-type Tf is uniquely glycolsylated with biantennary asialo- and agalacto-complex type N-glycans that carry bisecting β1,4-GlcNAc and core α1,6-Fuc.The glycans of serum-type Tf in the CSF are similar to those of Tf in serum. Biochemical analyses reveal that the apparent molecular size of brain-type Tf is smaller than that of serum-type Tf, and that hydrophobic patches are exposed on brain-type Tf as demonstrated by hydrophobic probe binding studies. Research indicates that brain-type Tf levels is decreased in idiopathic normal pressure hydrocephalus, in which CSF production is suspected to decrease, while brain-type Tf increased in spontaneous intracranial hypotension, in which CSF production is suspected to increase. These results suggest that brain-type Tf could be a biomarker of altered CSF production.

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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