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商品屬性：

背景：

IL-6是急性期反應的有效誘導劑。IL-6的快速產生有助于感染和組織損傷期間的宿主防御，但是IL-6合成過多與疾病病理學有關。在先天免疫應答中，IL-6是通過感染或組織損傷部位的Toll樣受體（TLR）識別病原體后，由髓樣細胞（例如巨噬細胞和樹突狀細胞）合成的。在適應性免疫應答中，IL-6是將B細胞分化為分泌免疫球蛋白的細胞（可能）是必需的。IL-6也在CD4+T細胞亞群的分化中起主要作用。IL-6是誘導生發中心形成所需的T濾泡輔助細胞（Tfh）發育的基本因素。IL-6與IL-21一起，可控制Tfh細胞的早期生成，對于有效的針對急性病毒感染的抗體反應至關重要。通過樹突狀細胞的“簇信號"將原始CD4+T細胞驅動到Th17譜系。骨髓瘤細胞的增殖和漿母細胞的存活也需要IL-6。

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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