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依利特(大連)分析儀器有限公司

分析型液相色譜系統的適用性試驗

時間:2016-12-20 閱讀:2867
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     分析型液相色譜系統采用高壓輸液系統,將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱,在柱內各成分被分離后,進入檢測器進行檢測,從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術。
    分析型液相色譜系統可反復使用、樣品不被破壞、易回收等優點,但也有缺點,與氣相色譜相比各有所長,相互補充。液相色譜的缺點是有“柱外效應”。在從進樣到檢測器之間,除了柱子以外的任何死空間(進樣器、柱接頭、連接管和檢測池等)中,如果流動相的流型有變化,被分離物質的任何擴散和滯留都會顯著地導致色譜峰的加寬,柱效率降低。液相色譜檢測器的靈敏度不及氣相色譜。
    分析型液相色譜系統適用性試驗的設計與實驗目的更加匹配
    系統適用性試驗的嚴格細膩程度取決于實驗目的。首先應考慮色譜系統被用于何種實驗,根據實驗目的來設計系統適用性試驗。如果一個 HPLC 方法僅用于定性鑒別,就其色譜系統的適用性試驗而言可以相對簡單寬松,只要可以確保被測成分峰與其他色譜峰有一定的分離度,具有適宜的出峰時間即可達到實驗目的。
    如果用于定量分析(如含量測定),則除要保證被測成分峰具有適宜的出峰時間外,還需檢驗系統是否能夠保證被測成分峰與其他色譜峰*分離,分離度一般應在1.5以上,同時還應測試被測成分峰峰面積的重復性是否良好,對照品溶液連續進樣5針的峰面積相對標準偏差應不大于2%,被測成分峰的峰型也應基本對稱,以保證分離效果和測量精度。對于小峰(如占總面積10%以下的色譜峰)峰面積的定量,或用峰高法定量時,就應對拖尾因子或對稱因子加以嚴格的規定,一般來說,拖尾因子應在 0.95~1.05之間,因為峰的對稱性對測量結果影響較大。
    如果檢查某種藥品的有關物質,且還需要分別檢查單個雜質和雜質總量,那么系統適用性試驗還應有一個重點,就是要有常見雜質難分離物質對分離度的測定指標。此外系統的檢測靈敏度試驗也就相對比較重要。如鹽酸二甲雙胍的有關物質檢查項下要求: 鹽酸二甲雙胍與雙氰胺的分離度應大于1.5,檢測靈敏度要求調節雙氰胺峰高為滿量程的10%。 如 果色譜系統是一個梯度洗脫系統,有時一個難分離物質對分離度的測試也不能*達到實驗目的。如果在梯度變化的前后均有需要檢測的雜質,分離度的測定指標一般應根據需要在梯度變化之前和之后都可加以制訂。在梯度洗脫系統中某個成分峰的保留時間也經常用來做系統適用性檢測的指標,給出吐峰時間范圍,如頭孢地尼,主成分頭孢地尼峰的保留時間要求22分鐘,E-異構體峰保留時間約為33分鐘,理論板數按頭孢地尼峰計算應不低于 7000。

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