生發(fā)中心激酶樣激酶抗體抗體分子標(biāo)記技術(shù)：

（一）原理

當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為殘基,殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實(shí)驗(yàn)中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。

（二）準(zhǔn)備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；

（三）操作要點(diǎn)

1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；

2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；

4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點(diǎn)有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。

柱式水樣DNAout

柱式土壤DNAout

柱式微生物基因組DNAout

柱式細(xì)菌DNAout（50次）

病毒DNA提取

96孔板病毒DNAout(離心法)（1次）

96孔板病毒DNAout(離心法)（5次）

96孔板病毒DNAout(真空法)（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

M13噬菌體單鏈基因組DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

λ噬菌體DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一管式病毒DNA-RNAout

一管式病毒DNAout（200次）

一管式病毒DNAout（50次）

柱式病毒DNAout

經(jīng)典法質(zhì)粒DNA提取

96孔板質(zhì)粒DNAout(離心法)

96孔板質(zhì)粒DNAout(真空法)（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

大提無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

大提無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

大提柱式Ti質(zhì)粒DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

大提柱式質(zhì)粒DNAout

革氏陽性細(xì)菌質(zhì)粒DNAout

中提柱式BAC DNAout

柱式BAC DNAout

柱式Ti質(zhì)粒DNAout（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

柱式酵母質(zhì)粒DNAout

柱式無內(nèi)毒素質(zhì)粒DNAout

柱式質(zhì)粒DNAout(50次)

一步法質(zhì)粒DNA提取

一步法96孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法）（停產(chǎn)）

一步法96孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（離心法）（停產(chǎn)）

一步法96孔板單菌落質(zhì)粒DNAout（真空法）（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一步法96孔板質(zhì)粒DNAout（離心法）

一步法96孔板質(zhì)粒DNAout（真空法）（見關(guān)聯(lián)產(chǎn)品）

一步法大提質(zhì)粒DNAout