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上海谷研實(shí)業(yè)有限公司資料大小
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1816次細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，主要有兩種方法：直接法和間接法。
1.直接免疫熒光標(biāo)記法的樣品制備取細(xì)胞(約1×106個(gè)／m1)，在每一管中分別加入適量熒光素標(biāo)記的一抗，充分混勻(如做雙標(biāo)或多標(biāo)染色，可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時(shí)加入)，孵育20～60min后，用PBS洗1～2次，離心收集細(xì)胞，加入緩沖液重懸，上機(jī)檢測(cè)。直接染色法抗體較貴，但操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn)確，適用于同一細(xì)胞群多參數(shù)同時(shí)測(cè)定。
2．間接免疫熒光標(biāo)記法的樣品制備取一定量的細(xì)胞懸液(約1×106個(gè)細(xì)胞／ml)，先加入特異的*抗體，待反應(yīng)*后洗去未結(jié)合抗體，再加入熒光標(biāo)記的第二抗體，生成抗原，抗體-抗抗體復(fù)合物，以FCM檢測(cè)其上標(biāo)記的熒光素被激發(fā)后發(fā)出的熒光。本方法費(fèi)用較低，二抗應(yīng)用廣泛，多用于科研標(biāo)本的檢測(cè)。但由于二抗一般為多克隆抗體，特異性較差，非特異性熒光背景較強(qiáng)，易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以標(biāo)本制備時(shí)應(yīng)加入陰性或陽(yáng)性對(duì)照。另外，由于間接法步驟較多，增加了細(xì)胞的丟失，不適用測(cè)定細(xì)胞數(shù)較少的標(biāo)本。
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