細(xì)胞核的分離技術(shù)說明

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細(xì)胞核的分離技術(shù)說明

(1)細(xì)胞懸浮于適量預(yù)冷的溶液A中，吹打均勻后加入勻漿管中，使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中，一手持之，一手將勻漿杵垂直插人管中，左右轉(zhuǎn)動(dòng)同時(shí)上下移動(dòng)勻漿杵，研磨若干次，用3層紗布過濾后(也可采用低速離心的方法)以去除未破裂細(xì)胞，后收集勻漿液于離心管中，然后制備一張滴片，做好標(biāo)記，顯微鏡下觀察完整細(xì)胞數(shù)量。如果細(xì)胞數(shù)量過多，則繼續(xù)勻漿，如果非常少，則勻漿完畢。

(2)將裝有勻漿液的離心管配平后，放人低溫離心機(jī)，4℃，以2500r／min離心15min；棄上清，將沉淀物用6ml含0．1％(V/V)TitonX-100的溶液A懸浮沉淀物，以2500r／min，離心15min；棄上清。

(3)將沉淀懸浮于6ml溶液B中，取6支超速離心管，每管加6ml溶液C，然后把細(xì)胞核懸液鋪在溶液C上層，以25 000r／min離心60min。

(4)棄去上清，用溶液A輕輕蕩洗管壁及沉淀物表面兩次。將離心管倒置，用濾紙擦干管口。

(5)向離心管底部滴加幾滴溶液A，用玻璃棒輕輕攪勻，然后補(bǔ)加10 ml溶液A，以2500g離心20min，棄上清液，沉淀物為純化的細(xì)胞核。

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