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461次腫瘤細胞在體外不易培養，建立能傳代的腫瘤細胞系更為困難。當腫瘤組織或細胞初代接種培養后，常出現以下幾種情況：*無細胞游出或移動;有細胞移動和游出，但無細胞增殖，細胞長時間處于停滯狀態以致難以傳代;有細胞增殖，傳若干代后停止生長或衰退死亡;傳數代后細胞增殖緩慢，經過一段停滯期后，才又呈旺盛生長狀態，形成穩定生長的腫瘤傳代細胞系。
以上現象說明腫瘤細胞對體外生存條件有較高的要求，并需經過對新環境的適應才能生長，因此欲獲得好的培養效果，不能局限于一般培養法，必須采用一些特殊的措施。
1.適宜底物：
把經過純化的細胞接種在不同的底物上，如鼠尾膠原底層、飼細胞層等。
2.生長因子：
應用促細胞生長因子，向培養液中增加一種或幾種促細胞生長因子。根據細胞種類不同選用不同的促生長物，常用有胰島素、雌激素以及其它生長因子。
為提高腫瘤細胞對體外培養環境的適應力和增加有活力癌細胞(干細胞)的數量，可采用動物體轉嫁接種成瘤后，再從動物體內取出進行培養，能提高體外培養的成功率。受體動物以裸鼠。
3.動物體媒介培養方法：
(1)瘤塊接種：取新鮮瘤組織，用Hanks液洗凈血污，切成1～3毫米小塊，用穿刺針頭吸一小瘤塊，用酒精棉球擦拭動物腹部后，直接刺入皮下，注入瘤塊;
(2)飼養觀察，待腫瘤生長達較大體積后，剝取出瘤組織;
(3)進行體外培養。
(4)為防止失敗，仍取部分瘤組織繼續在裸鼠體內傳代。通過裸鼠媒介接種，有活力的腫瘤細胞數量增多，細胞培養易于成功。
腫瘤細胞培養方法與培養正常細胞*相同，但成功率比正常細胞高。
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