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2139次1) 配制培養基使用新制備的三蒸水。一般在試驗前當天或前一天制備為好。調節pH值的酸堿溶液也應該使用這種水配制。
2) 制備培養基的器皿清洗要干凈，烤干后備用(濾器、濾膜、量筒、移液管及盛放培養基的小瓶等存放和轉移培養基液體的器具都應進行滅菌)。
3) 溶解培養基：將干粉培養基溶于總量1/3的水中，再用水洗包裝袋內面兩次，倒入培養液中。振蕩或超聲助溶，一般不要加熱助溶。
4) 補加試劑：根據包裝袋說明和試驗需要加入NaHCO3(2.0g)、谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等其他試劑。
5) 加抗生素：一般抗生素終濃度為――青霉素100U/ml，鏈霉素100U/ml。市售青霉素為80萬U/瓶，可溶于4ml體積，每一升培養液中加0.5ml即可。市售鏈霉素為100萬U/瓶，可溶于5ml體積，每一升培養液中也加0.5ml即可。無鏈霉素的情況下，用慶大霉素代替，終濃度調為50～200U/ml。
6) 調pH值：加水到900ml(在需要加10%小牛血清的情況下)，然后用5% NaHCO3調節pH到7.2。
7) 過濾除菌：宜采用0.45um和0.22um濾膜各一張，上層為0.45um，下層為0.22um，以保證過濾效果。注意濾膜正面(光面)朝上。過濾后分裝于小瓶中(100或200ml)。
8) 加小牛血清：根據培養基配制的量將小牛血清分裝，冷凍保存(-20℃)。臨用前將加入小牛血清(10%~20%)。
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