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目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>酵母 感受態(tài)細(xì)胞>> Y187Chemically 酵母感受態(tài)細(xì)胞

Chemically 酵母感受態(tài)細(xì)胞
  • Chemically 酵母感受態(tài)細(xì)胞
參考價(jià) 615
訂貨量 ≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
615
≥1
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 Abnbio
  • 型號(hào) Y187
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 所在地 合肥市
屬性

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更新時(shí)間:2024-03-27 16:03:18瀏覽次數(shù):480評(píng)價(jià)

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50支100ul
貨號(hào) ABG703-50 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥
主要用途 細(xì)胞培養(yǎng)
Y187 Chemically Competent Cell/Chemically 酵母感受態(tài)細(xì)胞
保存條件:-80℃

Y187 Chemically Competent Cell  酵母感受態(tài)細(xì)胞

基因型:

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3,112, gal4Δ, met–, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATAlacZ, MEL1

簡(jiǎn)要說明:

Y187菌株是GAL4系統(tǒng)酵母單雜,雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株,MATα型,可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒或與MATa型酵母菌株 (Y2HGold,AH109等)通過mating操作進(jìn)行篩庫試驗(yàn)。Transformation marker為: trp1,leu2,報(bào)告基因?yàn)椋簂acZ,MEL1。Y187有兩個(gè)報(bào)告基因:lacZ,MEL1,分別由兩種不同的啟動(dòng)子 (G1,M1)啟動(dòng),這兩種啟動(dòng)子只有GAL4識(shí)別的17bp核心區(qū)相同,其余部分均不同,大大降低了酵母雙雜假陽性發(fā)生的概率。Y187感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,pGADT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說明:

1. 取pBait-AbAi質(zhì)粒5µg,BstBI或 BbsI酶切1h,回收;

2. 取一支無菌的1.5ml EP管,依次加入預(yù)冷的預(yù)冷的線性pBait-AbAi質(zhì)粒1-5 µg(體積不高于15 µl),Carrier DNA(95-100 度5min 快速冰浴,重復(fù)一次)10µl,100µl冰上融化的Y1HGold感受態(tài)細(xì)胞,PEG/LiAc 500µl,輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次;

3. 30℃水浴30min,每10min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次;

4. 每支加入20µl的二甲基亞砜(用以提高轉(zhuǎn)化效率,可不做);

5. 42℃水浴15min,每5min輕輕翻轉(zhuǎn)混勻6-8次;

6. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清,每支加入1ml的YPD Plus(YPDA)于30℃復(fù)蘇1h(用以提高轉(zhuǎn)化效率,可不做);

7. 12000rpm瞬時(shí)離心棄上清,用100µl 0.9% NaCl重懸,涂板,30℃培養(yǎng)48-96h。

注意事項(xiàng):

1.PEG在低溫下易析出,請(qǐng)?jiān)诔叵聎an全溶解后使用。

2.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。

3.同時(shí)轉(zhuǎn)化2-3種質(zhì)粒時(shí)可增加質(zhì)粒的用量。

4.Y1HGold酵母菌株對(duì)高溫敏感,最適生長(zhǎng)溫度為27-30℃;高于31℃,生長(zhǎng)速度和轉(zhuǎn)化效率呈指數(shù)下降。

5.菌落變粉不是污染,是酵母細(xì)胞生長(zhǎng)中一個(gè)常見現(xiàn)象。當(dāng)細(xì)胞在平板培養(yǎng)幾天后,平板上的Adenine被酵母消耗完畢,酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用,然而,Y1HGold的ADE2基因被破壞,Adenine合成途徑受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中間產(chǎn)物P-ribosylaminoimidazole(AIR)在細(xì)胞中積累而使菌落變?yōu)榉奂t色。

6.酵母在缺陷培養(yǎng)基中生長(zhǎng)速度比YPDA培養(yǎng)基慢,培養(yǎng)基中缺陷成分越多,生長(zhǎng)越慢,以轉(zhuǎn)化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆;涂SD單缺平板29℃,48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆。





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