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目錄:合肥恩派爾貿易有限公司>>Abnbio感受態細胞>>酵母 感受態細胞>> Y187Chemically 酵母感受態細胞

Chemically 酵母感受態細胞
  • Chemically 酵母感受態細胞
參考價 615
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協議為準
615
≥1
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 Abnbio
  • 型號 Y187
  • 廠商性質 經銷商
  • 所在地 合肥市
屬性

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更新時間:2024-03-27 16:03:18瀏覽次數:481評價

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供貨周期 現貨 規格 50支100ul
貨號 ABG703-50 應用領域 化工,生物產業,制藥/生物制藥
主要用途 細胞培養
Y187 Chemically Competent Cell/Chemically 酵母感受態細胞
保存條件:-80℃

Y187 Chemically Competent Cell  酵母感受態細胞

基因型:

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101, trp 1-901, leu 2-3,112, gal4Δ, met–, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATAlacZ, MEL1

簡要說明:

Y187菌株是GAL4系統酵母單雜,雙雜實驗用菌株,MATα型,可直接轉化質粒或與MATa型酵母菌株 (Y2HGold,AH109等)通過mating操作進行篩庫試驗。Transformation marker為: trp1,leu2,報告基因為:lacZ,MEL1。Y187有兩個報告基因:lacZ,MEL1,分別由兩種不同的啟動子 (G1,M1)啟動,這兩種啟動子只有GAL4識別的17bp核心區相同,其余部分均不同,大大降低了酵母雙雜假陽性發生的概率。Y187感受態細胞經特殊工藝制作,pGADT7質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

操作說明:

1. 取pBait-AbAi質粒5µg,BstBI或 BbsI酶切1h,回收;

2. 取一支無菌的1.5ml EP管,依次加入預冷的預冷的線性pBait-AbAi質粒1-5 µg(體積不高于15 µl),Carrier DNA(95-100 度5min 快速冰浴,重復一次)10µl,100µl冰上融化的Y1HGold感受態細胞,PEG/LiAc 500µl,輕輕翻轉混勻6-8次;

3. 30℃水浴30min,每10min輕輕翻轉混勻6-8次;

4. 每支加入20µl的二甲基亞砜(用以提高轉化效率,可不做);

5. 42℃水浴15min,每5min輕輕翻轉混勻6-8次;

6. 12000rpm瞬時離心棄上清,每支加入1ml的YPD Plus(YPDA)于30℃復蘇1h(用以提高轉化效率,可不做);

7. 12000rpm瞬時離心棄上清,用100µl 0.9% NaCl重懸,涂板,30℃培養48-96h。

注意事項:

1.PEG在低溫下易析出,請在常溫下wan全溶解后使用。

2.轉化高濃度的質粒可相應減少最終用于涂板的菌量。

3.同時轉化2-3種質粒時可增加質粒的用量。

4.Y1HGold酵母菌株對高溫敏感,最適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉化效率呈指數下降。

5.菌落變粉不是污染,是酵母細胞生長中一個常見現象。當細胞在平板培養幾天后,平板上的Adenine被酵母消耗完畢,酵母試圖通過自身代謝途徑合成Adenine以供利用,然而,Y1HGold的ADE2基因被破壞,Adenine合成途徑受阻;又由于其ADE4,5,6,7,8基因均正常,所以造成中間產物P-ribosylaminoimidazole(AIR)在細胞中積累而使菌落變為粉紅色。

6.酵母在缺陷培養基中生長速度比YPDA培養基慢,培養基中缺陷成分越多,生長越慢,以轉化涂板為例:涂YPDA平板29℃,48h培養可見直徑1mm克隆;涂SD單缺平板29℃,48-60h培養可見直徑1mm克隆,涂SD雙缺平板29℃,60-80h培養可見直徑1mm克隆,涂SD三缺或四缺平板平板29℃,80-90h培養可見直徑1mm克隆。





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