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原代細胞染色體標本制作
閱讀：248 發布時間：2018-6-5一、原代細胞實驗目的和要求
通過這一實驗，要求學生了解哺乳動物染色體標本的制作方法，并對動物染色體進行觀察。
二、實驗原理
由于小鼠四肢骨內骨髓細胞中的造血干細胞是生成各種血細胞和原始細胞，具有高度的分裂能力，本實驗采用這一材料，通過前處理，低滲，固定，制片，染色等步驟制得染色體標本，可觀察到許多處于分裂中期的染色體，可以進行染色體組型分析。
三、實驗用品
1．材料：小白鼠
2．器具：注射器（1ml,5ml）、5號針頭、解剖盤、解剖剪、鑷子、玻璃吸管、10ml刻度的離心管、離心機、載玻片、蓋玻片、顯微鏡、濾紙、擦鏡紙、棉花、量筒、天平、恒溫水浴鍋
3．藥品：0.01%秋水仙素、0.075MKCl、固定液（甲醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液、0.01M磷酸緩沖液(PH6.8)，0.85%生理鹽水。
四、實驗步驟
1．預處理：實驗前2.5-3小時，按每克體重注射0.02ml，給小白鼠腹腔注射秋水仙素。
2．斷頸處死動物，解剖小鼠內生殖器官，鑒別雌雄性別。
3．剝取股骨，剔去肌肉組織，剪去兩端的股骨頭
4．沖洗骨髓：吸取0.6ml生理鹽水,注射器針頭插入股骨一端,反復沖洗骨髓到8ml的離心管中.
5．低滲：加入4.4ml0.075MKCl溶液,37oC水浴低滲40分鐘，中間（約20分鐘）用吸管吹打一次，使細胞分散，懸浮于溶液中。
6．離心：1000rpm離心10分鐘后棄去上清液，離心之前加1ml固定液并用吸管輕輕吹勻，進行預固定。
7．固定I：沿管壁慢慢加入固定液5ml，用吸管吹打成細胞懸液后，室溫下靜置30分鐘，15分鐘時吹打一次。
8．離心：1000rpm離心10分鐘，棄上清液。
9．固定II：同固定I。
10．離心：同8離心后加0.3-0.5ml固定液，吸管吹打成細胞懸液。
11．滴片：用吸管吸取細胞懸液，滴在預冷的載玻片上，在酒精燈火焰上微微加熱，室溫晾干
12．染色：10% Giemsa染液染色30分鐘；
鏡檢：低倍———高倍 。
五、注意事項
低滲與離心等步驟的操作要輕。
觀察細胞的標準為：
1．細胞完整，輪廓清晰，染色體分布在同一水平面上。
2．染色體形態和分布良好。
3．無重疊，即使有個別重疊，也要能明確辯認，以免差錯。
4．所觀察的細胞處于同一有絲分裂階段，即染色體螺旋化程度或染色體長短大致一樣。
在所觀察的原代細胞周圍，沒有離散的單個或多個染色體存在，以免影響計數。
5 x 10^5 cells/vial 人支氣管上皮細胞 HBEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人氣管上皮細胞 HTEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人小氣道上皮細胞 HSAEpiC
5 x 10^5 cells/vial 人肺成纖維細胞 HPF
1 x 10^6 cells/vial 人肺成纖維細胞 HPF
5 x 10^5 cells/vial 人支氣管平滑肌細胞 HBSMC
5 x 10^5 cells/vial 人氣管平滑肌細胞 HTSMC
5 x 10^5 cells/vial 人支氣管成纖維細胞 HBF
5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌細胞 HSkMC
5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌衛星細胞 HSkMSC
5 x 10^5 cells/vial 人骨骼肌成肌細胞 HSkMM
原代細胞