AAV-293（人胚腎細胞）源自293 [HEK-293]細胞株，但AAV-293細胞產(chǎn)生的病毒滴度更高。293 [HEK-293]細胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細胞。跟293 [HEK-293]細胞一樣，AAV-293細胞反式表達腺病毒E1基因，當共轉(zhuǎn)染三個AAV助質(zhì)粒（一個含ITR的質(zhì)粒、pAAV-RC和E1缺失助質(zhì)粒）時，AAV-293細胞可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒相關病毒顆粒。
一、細胞基本屬性
細胞名稱 ：人胚腎細胞
細胞別稱： AAV-293
細胞貨號： SNL-016
細胞種屬： 人
生長情況 ：貼壁
培養(yǎng)條件： H-DMEM+10%FBS+1%雙抗
培養(yǎng)環(huán)境： air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、細胞培養(yǎng)操作
換液周期 ：2-3天
培養(yǎng)基體積 ：T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
傳代比例 ：1:2-1:4（具體情況視細胞生長速度及密度決定）
傳代方法：
1.盡量吸干凈T25瓶原培養(yǎng)基；
2.加3-4ml 常溫PBS輕輕潤洗細胞10-20s，吸走潤洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰酶，輕輕晃動培養(yǎng)瓶以使胰酶鋪勻瓶底細胞層；
4.將培養(yǎng)瓶放入37度培養(yǎng)箱消化；
5.消化到細胞間隙變大，但未*脫落時加2-3ml*培養(yǎng)基終止胰酶消化；
6.混勻細胞，900rpm離心3-5min，棄上清；
7.加新的*培養(yǎng)基輕輕重懸細胞，均勻分到新的培養(yǎng)瓶里；
8.補足*培養(yǎng)基，將培養(yǎng)瓶放回培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)；
注意事項 ：不同品牌胰酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產(chǎn)生過多氣泡以免影響細胞狀態(tài)。
三、細胞凍存操作
凍存液配方： 92%FBS+8%DMSO(新手推薦)或92%*培養(yǎng)基+8%DMSO(高手推薦);
凍存規(guī)格： 200-300萬/ml，1ml每管
凍存方法：
1. 離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2. 將細胞懸液盡快移入已經(jīng)做好標記的凍存管；
3. 將凍存管轉(zhuǎn)入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉(zhuǎn)入-80度過夜，第二天轉(zhuǎn)入液氮保存
注意事項 ：凍存細胞轉(zhuǎn)入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性，若有異常，及時調(diào)整實驗方案
Tips：
1.細胞貼壁較弱，消化時間偏短，注意控制消化時間；
2.T25瓶細胞發(fā)貨易漂浮成團，收貨若成團按收貨處理規(guī)定進行；
3.細胞培養(yǎng)時可能會有部分黑點，屬正?，F(xiàn)象，具體原因參見培養(yǎng)操作說明2、3條；
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