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線粒體檸檬酸含量試劑盒 三羧酸

參  考  價(jià)面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號(hào)BK6010

品       牌NobleRyder/諾博萊德

廠商性質(zhì)生產(chǎn)商

所  在  地北京市

更新時(shí)間:2025-04-02 15:35:41瀏覽次數(shù):54次

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供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/96S
貨號(hào) BK6010 應(yīng)用領(lǐng)域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥
主要用途 由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成
MCA 是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。
線粒體檸檬酸含量試劑盒 三羧酸

線粒體檸檬酸(Mitochondrion citric acid, MCA)含量試劑盒說明書

微量法 100 管/96

線粒體檸檬酸含量試劑盒 三羧酸

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義:

MCA 是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰 CoA 與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。配合測(cè)定丙tong酸含量、丙tong酸脫氫酶活性、乙酰 CoA 含量、檸檬酸合酶活性和 MCA 含量,其中(1)丙tong酸含量和丙tong酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙tong酸含量、丙tong酸脫氫酶活性和乙酰CoA 含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰 CoA 情況,(3)乙酰CoA 含量、檸檬酸合酶活性和MCA 含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。

測(cè)定原理:

MCA 在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映 MCA的含量。

組成:

產(chǎn)品名稱

BK6010-100T/96S

Storage

酸性提取液:液體

100ml

4℃

堿性提取液:液體

100ml

4℃

試劑一:液體

6ml

4℃

試劑二:液體

2ml

4℃

試劑三:粉劑

1  

4℃

標(biāo)準(zhǔn)液:液體

1ml

4℃

說明書

一份

試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加入 6ml 蒸餾水充分溶解待用;用不完的試劑 4℃保存;標(biāo)準(zhǔn)液:液體 1ml×1 支,10μmol/ml 檸檬酸標(biāo)準(zhǔn)液,4℃保存。

自備儀器和用品:

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、研缽、蒸餾水。

線粒體中檸檬酸提取:

0.05~0.1g 樣品(建議稱 0.1g 樣本),加入 0.5ml 酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃離心 5min;取上清至另一EP 管中,11000g/min 4℃離心 10min,棄上清(取 300μl 該上清液和 300μl 堿性提取液中和后可用于細(xì)胞質(zhì)CA 含量測(cè)定);沉淀即線粒體,向沉淀中加入 0.5ml 酸性提取液,充分懸浮溶解,超聲波破碎(功率 20%,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),取此溶液 300μl 300μl 堿性提取液中和,混勻,置冰上待測(cè)(不可用于蛋白質(zhì)含量測(cè)定)。

測(cè)定步驟:

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min 以上,調(diào)節(jié)波長到 330nm,蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一、二和三 37℃預(yù)熱 10min

3、樣本測(cè)定:

空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要各做一個(gè)。

試劑名稱(μl)

空白管

標(biāo)準(zhǔn)管

測(cè)定管

試劑一

60

60

60

蒸餾水

60



標(biāo)準(zhǔn)液


60


樣本



60

試劑二

20

20

20

試劑三

60

60

60

充分混勻,330nm 立即測(cè)定初始吸光值A1 37℃孵育 30min 后的吸光值A2,ΔA=A2A1

檸檬酸含量計(jì)算:

按蛋白濃度計(jì)算

檸檬酸含量(μmol/mg prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管) ×V 樣]÷(V ÷Cpr)=10×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管)÷Cpr蛋白質(zhì)含量需要另外測(cè)定。

按樣本鮮重計(jì)算

檸檬酸含量(μ mol/g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)管×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管) ×V 樣]÷(W×V樣÷V 樣總)=10×(ΔA 測(cè)定管-ΔA 空白管)÷(ΔA 標(biāo)準(zhǔn)管-ΔA 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)管:標(biāo)準(zhǔn)液濃度,10μmol/mlV 樣:加入反應(yīng)體系中樣本體積:0.06ml;V 樣總:加入提取液體積:1ml;Cpr:樣品蛋白濃度,mg/ml;W:樣本質(zhì)量,g。

注意:最di檢測(cè)限為 10nmol/mg prot 1μmol/g 鮮重。


線粒體檸檬酸含量試劑盒 三羧酸

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