目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 染料法實時 RCA 試劑盒
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50次 |
---|---|---|---|
貨號 | XY-D-1579 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | SYBR Realtime RCA Kit |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 12個月 |
產品簡介:
RCA(Rolling Circle Amplification,滾環擴增)是利用 phi29 DNA 聚合酶的超長合成能力,在一定條件下(如隨機引物、dNTP、Mg 離子存在時)能夠以線狀的超長基因組DNA 或環化后的短DNA 為模板進行全基因組擴增的技術。本產品是基于 RCA 技術,針對環狀 DNA 為模板專門開發的 RCA 試劑盒。
產品特點:
1.即開即用,十分簡單方便,用戶不需要辛苦摸索條件。
2.直接使用純化的環狀單鏈DNA 或環狀雙鏈 DNA 為模板。如果樣本為線狀 DNA, 需要預先對其進行環化(本公司有單鏈 DNA 環化和雙鏈 DNA 環化試劑盒)。
3.RCA 屬于恒溫擴增,操作簡單,但如果要實時監測,需要熒光定量 PCR 儀器。如果沒有,也可以電泳檢測或PCR 檢測擴增效果。
4.含熒光染料,可以實時監測 RCA 反應過程,不需要跑電泳檢測,節約寶貴樣品(因為進行 RCA 擴增的樣品都非常珍貴)。
5.實時檢測使得反應可以在平臺期后就可以結束,避免 phi29 DNA 聚合酶具有的強 3-5 外切酶活性降解已經合成的 DNA。
6.phi29 DNA 聚合酶具有的強 3-5 外切酶活性,故擴增具有高保真性。
7.可以將模板 DNA 在幾個小時到十幾小時內擴增萬倍左右。
8.本產品足夠 50 次 10 ?L 體系的熒光染料實時 RCA 反應。
9.得到的 DNA 可以直接用于測序、酶切或 PCR 等后續實驗。染料法實時 RCA 試劑盒只能用于科研。
產品參數:
規格及成分
成分 | 規格 | 包裝 |
4×染料法實時RCA Mix(無酶無引物) | 125ul | 0.5 mL 綠蓋管 |
RCA 專用隨機引物溶液 | 100ul | 0.5 mL 白蓋管 |
phi29 DNA 聚合酶,10 U/μL | 25ul | 0.5 mL 紅蓋管 |
使用手冊 | 1份 | 無 |
保存和運輸
低溫運輸,-20℃保存,有效期為一年。
自備試劑
環狀單鏈 DNA 模板或環狀雙鏈 DNA 模板、超純水。
使用方法:
1.按下表設置 10 uL 的環狀DNA RCA 反應:
2.放熒光定量 PCR 儀器上,設置 30℃保溫 16 小時,每 10 分鐘設置成一個循環, 采集一次 SYBR 通道的熒光信號。由于是可以實時檢測反應,所以反應不一定要在設置時間到達后結束,可以在擴增曲線進入平臺期后(已經沒有新的 DNA 合成)結束。因為phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性,在聚合反應停止后,它可能會進入酶切模式,逐漸降解已經合成的DNA。
3.65℃保溫 10 分鐘滅活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性, 因此必須滅活,否則它將逐漸降解已經合成的DNA。
4.典型實驗結果。有擴增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線,無模板對照將沒有此標準擴增曲線(見下圖)或擴增曲線:
5.如果沒有熒光定量 PCR 儀器,則只能電泳檢測或PCR 檢測是否有擴增。
6.擴增所得 DNA 可以用于后續實驗。
選擇我們的染料法實時 RCA 試劑盒,就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!