目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>清除劑>> 細菌DNA純化試劑盒(過柱法)
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50次 |
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貨號 | XY-D-1699 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | / |
保存條件 | 常溫 | 有效期 | 12個月 |
產品簡介:
本產品可以用于絕大多數革氏陽性和陰性細菌基因組 DNA 的快速提取。
產品特點:
1.操作簡單,整個過程不到 20 分鐘。
2.產率一般在 5-20 μg/mL 過液培養的飽和菌液(108-109 個細胞)。
3.OD260/280 一般在 1.8 以上,可直接用于 PCR、酶切、雜交等實驗。
4.DNA 片段長度一般在 40-50 kb 左右。
5.每次提取可以處理 0.1-1.5 mL 的細菌,也可以使用菌落。
6.價廉物美,與國外同類產品相比質量相當,但價格便宜。
7.安全無毒,本試劑盒對人體無害,無腐蝕性和刺激性氣味。
8.細菌DNA純化試劑盒(過柱法)只能用于科研。
產品參數:
成 份 規格包裝材料
溶菌-酶干粉 600 mg1.5 mL 白色管
細菌 DNA 純化溶液A15 mL15 mL 本色瓶
細菌 DNA 純化溶液 B 7.5 mL10 mL 本色瓶
細菌 DNA 純化溶液 C 30 mL30 mL 本色瓶
離心吸附柱 50 套塑料袋
通用洗柱液 50 mL60 mL 本色瓶
DNA 洗脫液(基因組純化專用) 10 mL10 mL 本色瓶
使用手冊 1 份1 份
運輸及保存
常溫運輸及保存(溶菌-酶干粉可以常溫運輸,但長期保存需要放 4℃或-20℃),有效期一年。
自備試劑
氯仿、自備無菌水。
使用方法:
注意:細菌 DNA 純化溶液 A 和細菌 DNA 純化溶液 B 容易產生沉淀,細菌 DNA 純化溶液B 十分粘稠,均需要放置在 65℃預熱使沉淀溶解、粘稠度降低,用前充分搖勻。一: 對革氏陰性細菌樣品,不需用溶菌-酶
1.將 0.1-1.5 mL 過夜培養的菌液轉移到 1.5 mL 塑料離心管中,12,000 ×g 室溫離心1 分鐘沉淀細菌,棄上清。
2.加入 300 μL 預熱的溶細菌 DNA 純化液A 到細菌沉淀中,充分吹打均勻。
3.再加入 150 μL 預熱的細菌 DNA 純化溶液 B 到離心管中,顛倒數次混勻。此時溶液中可能有白色絲狀懸浮物產生。由于溶液 B 比較粘稠,可以采取稱量方法取用,150 μL 約等于 150-160 mg。也可以將 1 mL 槍頭剪去一截再吸取。
4.65℃放置 3-5 分鐘。如果室溫放置,DNA 產量會降低 10-20%。
5.加入 200 μL 自備氯仿,震蕩混勻 10-30 秒,此時溶液將呈乳白色。
6.12,000 ×g 室溫離心 2 分鐘。此時上清液將變得透明,中間層有白膜。小心轉移上清液到一個新的 1.5 mL 塑料離心管中,避免觸及中間層的白膜。
7.加入 1.5 倍體積(約 0. 7 mL)的細菌 DNA 純化溶液 C,顛倒混勻后全部轉移到離心吸附柱中,室溫放置至少 2 分鐘。
8.12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘,DNA 將吸附在離心吸附柱的膜上,倒棄收集管中的穿透液。
9.將 0.5 mL 通用洗柱液加入離心柱中,12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘,棄穿透液。
10.重復上步操作一次。
11.空甩半分鐘去除殘留液體,將離心吸附柱轉移到新的 1.5 mL 離心管中。
12.加 50-100 μL DNA 洗脫液(基因組純化專用),室溫放置 3-5 分鐘。
13.12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘即得 DNA 溶液。
14.由于本產品使用的離心吸附柱吸附 DNA 的能力較強,可以重復上步操作一次以便得到更多的 DNA。
15.直接取 5-10 μL 電泳檢測DNA,其余放冰箱備用。二: 對革氏陽性細菌樣品,需用溶菌-酶
1.將 0.1-1.5 mL 過夜培養的革氏陽性細菌 12,000 ×g 室溫離心 1 分鐘后, 重懸于 0.6
mL 溶菌液中(溶菌液配制:30 mL 無菌水+600 mg 溶菌-酶,配制后最好分裝成小管并放-20℃長期保存,每次只用一小管),顛倒混勻 5-10 次后放 37℃保溫至少 30 分鐘(有的革氏陽性菌種可能需更長時間,需要自己根據不同的細菌摸索)。
2.12,000 ×g 室溫離心 10 分鐘,小心棄上清。
3.后續處理接上面的革氏陰性細菌提取步驟中的第 2 步。
三: 其他注意事項
1.可以直接使用細菌菌落提取 DNA,操作時直接將細菌菌落挑入到細菌 DNA 純化溶液A 中,后續操作同上。
2.從單個菌落中提取到的 DNA 較少,所以只用 30 μL DNA 洗脫液(基因組純化專用)洗脫。
選擇我們的細菌DNA純化試劑盒(過柱法),就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!