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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

TRAP 專(zhuān)用細(xì)胞裂解液通常用于端粒酶重復(fù)片段擴(kuò)增（TRAP）實(shí)驗(yàn)中，以提取細(xì)胞中的端粒酶。其作用是裂解細(xì)胞，釋放出細(xì)胞內(nèi)的端粒酶，以便后續(xù)進(jìn)行端粒酶活性的檢測(cè)。本產(chǎn)品只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

產(chǎn)品規(guī)格

10mL

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

無(wú)

使用方法：

BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒 ，PBS。

注意：端粒酶的組成成分中有 RNA，極容易被降解，因此，提取端粒酶應(yīng)該跟提取 RNA 一樣，盡量在低溫條件下快速操作、最好使用本公司的固相 RNase 清除劑預(yù)先清潔試驗(yàn)臺(tái)面等容易有 RNase 污染的地方。

1.對(duì)冷凍的實(shí)體組織：將 50-100 mg 在-80℃冷凍的組織放裝有液氮的研缽中研磨成粉末，再轉(zhuǎn)移到預(yù)冷的玻璃勻漿器中，加入 200 μL 預(yù)冷的 TRAP專(zhuān)用細(xì)胞裂解液，溫和手動(dòng)勻漿 6 次后冰浴 30 分鐘，每間隔 5 分鐘渦旋振蕩一次，然后直接進(jìn)入第 4 步操作。

注意：為保證裂解效果，可在顯微鏡下觀察確保大部分細(xì)胞已經(jīng)裂解。如果組織樣品不足 50-100 mg，可以按比例降低TRAP專(zhuān)用細(xì)胞裂解液用量。在-20℃保存的實(shí)體組織放置 2 個(gè)月后就失去端粒酶活性，而在-80℃保存的實(shí)體組織放置數(shù)年還有端粒酶活性。

2.對(duì)新鮮的培養(yǎng)細(xì)胞和組織：用自備的預(yù)冷 PBS 洗滌 1E6 個(gè)經(jīng)過(guò)胰-酶處理的細(xì)胞或 50-100 mg 經(jīng)過(guò)胰-酶處理的新鮮組織，3000 g 4℃離心 5 分鐘，棄上清，細(xì)胞沉淀可以直接使用，也可以放-80℃保存后續(xù)使用。在細(xì)胞或組織沉淀中加入200 μL 預(yù)冷的 TRAP專(zhuān)用細(xì)胞裂解液，輕柔吹打 3 次懸浮細(xì)胞或組織。對(duì)新鮮細(xì)胞：渦旋振蕩 10 秒后置冰浴 30 分鐘，每間隔 5 分鐘渦旋振蕩一次。對(duì)新鮮組織：在冰上用玻璃勻漿器輕柔勻漿后冰浴 30 分鐘，每間隔 5 分鐘渦旋振蕩一次。如果細(xì)胞不足 1E6 或 50-100 mg，按比例降低 TRAP專(zhuān)用細(xì)胞裂解液用量。

3.14000 g 4℃離心 20 分鐘，收集 160 μL 上清，留 40 μL 不取。

4.取部分上清液用自備 BCA 蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定總蛋白濃度。

5.測(cè)出各樣品的蛋白濃度后，用 TRAP專(zhuān)用細(xì)胞裂解液將各樣品的蛋白濃度調(diào)成 3 μg/μL，然后分裝合適的量到離心管中，將實(shí)驗(yàn)所需的數(shù)量放冰上待用，其余的放-80℃長(zhǎng)期保存（可存放一年）。此步所得樣本稱(chēng)為端粒酶待測(cè)樣本。

6.對(duì)每個(gè)樣本，一次實(shí)驗(yàn)需要兩管，一管用于測(cè)定端粒酶活性，一管用作該待測(cè)樣本的熱滅活陰性對(duì)照。制備方式是每個(gè)樣本取一管端粒酶待測(cè)樣本，95℃處理

10 分鐘滅活端粒酶，放冰上待用。沒(méi)有用完的可放-80℃長(zhǎng)期保存（可存放一年）供下次使用。

7.按常規(guī)操作進(jìn)行后續(xù)的端粒酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。

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