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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本產(chǎn)品是在探針法 qPCR MasterMix 基礎(chǔ)上改進(jìn)的產(chǎn)品，可以直接用唾液為模板進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，不需要任何 DNA 純化過程。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.以 2×Mix 提供，用戶只需準(zhǔn)備模板、引物和探針即可以進(jìn)行探針法實(shí)時(shí)定量 PCR。

2.直接以唾液為模板，不需要任何 DNA 純化和釋放過程。

3.唾液用量可高達(dá)到總反應(yīng)體積的 35%，20uL 體系可以用 7uL 唾液，避免了漏檢。

4.靈敏度高，可以檢測(cè) 10 拷貝的 DNA/反應(yīng)。

5.提供足夠 8 次的陽(yáng)性對(duì)照引物、探針和模板。

6.可用于基因表達(dá)分析、SNP 分析、拷貝數(shù)分析等實(shí)驗(yàn)。也可以用于定性檢測(cè)。

7.本產(chǎn)品反復(fù)凍融 20 次對(duì)擴(kuò)增效果沒有任何影響。

8.本產(chǎn)品足夠 100 次 20uL 體系的探針法 qPCR 反應(yīng)。

9.2×唾液直擴(kuò)探針法 qPCR MasterMix只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成份規(guī)格包裝

2×唾液直擴(kuò)探針法 qPCR

MasterMix1 mL1.5mL 紅色蓋

人基因組 DNA 溶液

（10E4 拷貝/uL）50uL0.5mL 藍(lán)蓋管

使用手冊(cè)1 份無

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

唾液、自備引物、超純水。

使用方法：

下列操作以定性實(shí)驗(yàn)為例

1. 如果有 N 個(gè)樣品，則設(shè)置 N+2 個(gè)反應(yīng)，多出的一個(gè)是擴(kuò)增陰性對(duì)照（NC），一個(gè)是擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照（PC）。可以使用確認(rèn)能被所用引物和探針擴(kuò)增并檢測(cè)的 DNA 作為陽(yáng)性對(duì)照。本試劑盒提供少量人基因組 DNA 溶液為陽(yáng)性對(duì)照。在 N+2 個(gè) PCR 管中按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

成分N 個(gè)樣品管NC 管PC 管

2×唾液直擴(kuò)探針法 qPCR

MagicMix各 10 uL10 uL10 uL

自備引物對(duì)（10uM each）各 2 uL2 uL2 uL

自備探針（5uM）各 1 uL1 uL1 uL

N 個(gè)唾液樣本各 1-7 uL--

人基因組 DNA 溶液--7 uL

補(bǔ)自備超純水均到 20 uL到 20 uL到 20 uL

2.放入熒光 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增, 下表的擴(kuò)增參數(shù)僅供參考。具體需要以使用的引物探針 Tm 和靶分子長(zhǎng)度進(jìn)行調(diào)節(jié)。一般選擇三步法 PCR：

如果引物 Tm 值接近 60℃，也可以選擇兩步法 PCR：

3.數(shù)據(jù)處理

一般情況下，陰性對(duì)照 Ct 大于或等于 40。陽(yáng)性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct 值應(yīng)該小于或等于 30。對(duì)待測(cè)樣品，如果其 Ct 大于或等于 40 則為陰性，如果小于或等于 35 則為陽(yáng)性。如果在 35-40 之間，則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的 Ct 值如果大于或等于 40 則為陰性，如果小于 40，則為陽(yáng)性。本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照。

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