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牛膽酸（Cholic acid）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛膽酸(Cholic acid)水平。用純化的牛膽酸(Cholic acid)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入膽酸(Cholic acid)，再與HRP 標記的膽酸(Cholic acid)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹-底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的膽酸(Cholic acid)呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中牛膽酸(Cholic acid)濃度。

試劑盒組成

1.30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶    7.終止液6ml×1 瓶

2.酶標試劑6ml×1 瓶                  8.標準品（240 pmol/L）0.5ml×1 瓶

3.酶標包被板12 孔×8 條           9 .標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4.樣品稀釋液6ml×1 瓶              10.說明書1 份

5.顯色劑A 液6ml×1 瓶             11.封板膜2 張

6.顯色劑 B 液6ml×1/瓶             12.密封袋1 個

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

120pmol/L5 號標準品150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液

60pmol/L4 號標準品150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

30pmol/L3 號標準品150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

15pmol/L2 號標準品150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

7.5pmol/L1 號標準品150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，然后再加待測樣品 10µl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。

4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復 5 次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。

7.溫育：操作同 3。

8.洗滌：操作同 5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10 分鐘.

10.終止：每孔加終止液 50µl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止液后 15 分鐘以內進行。

計算

以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3.各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值大于標準品孔第一孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.牛膽酸（Cholic acid）ELISA試劑盒不同批號組分不得混用。