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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 96T/48T |
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貨號 | XY-S0785 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè) |
主要用途 | 科研 | 保存條件 | 2-8℃ |
有效期 | 6個月 | 樣本 | 血清,血漿及相關(guān)液體 |
玉米赤霉烯酮(ZEN)ELISA試劑盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個月
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用競爭ELISA方法,在微孔板包被有玉米赤霉烯酮(ZEN)偶聯(lián)抗原,加入玉米赤霉烯酮(ZEN)標(biāo)準(zhǔn)品或樣品,游離玉米赤霉烯酮(ZEN)與微孔條上預(yù)包被的玉米赤霉烯酮(ZEN)偶聯(lián)抗原互相競爭抗玉米赤霉烯酮(ZEN)抗體酶標(biāo)記物,用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色,用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測,吸光值與樣品中玉米赤霉烯酮(ZEN)含量成反比,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中玉米赤霉烯酮(ZEN)的含量。
試劑盒組成
預(yù)包被的玉米赤霉烯酮(ZEN)偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板:1塊(12孔×8條)。
玉米赤霉烯酮(ZEN)標(biāo)準(zhǔn)品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ng/ml,0.5 ng/ml,2 ng/ml,20 ng/ml,200 ng/ml,400 ng/ml。
抗玉米赤霉烯酮(ZEN)抗體酶結(jié)合物:1瓶(6ml)。
顯色液A:1瓶(6ml)。
顯色液B:1瓶(6ml)。
終止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
樣本-稀釋液:1瓶(10×, 6ml),用于樣品稀釋用。
濃縮洗滌液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
說明書一份。
操作步驟
實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫(25±2℃),時間約2小時。回溫至室溫(25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。
使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
請不要改變分析程序
請使用精確的微量移液器
操作一旦開始,請不要中斷任何程序
ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序,請嚴(yán)格按照要求操作
為避免交叉污染,每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣
加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面
分析步驟
預(yù)先進(jìn)行編號,標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置,推薦進(jìn)行雙孔檢測
取所需數(shù)量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(20×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
在B0孔中加入50µl 0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液
在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液
在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
在所有孔中加入50µl的抗玉米赤霉烯酮(ZEN)抗體酶結(jié)合物
輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。
37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板,可以減少雙孔誤差)
甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完-全除去孔中液體。
反應(yīng)
洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B;輕微晃動反應(yīng)板使之徹-底混勻
37℃溫浴10min
每孔中加入50µl終止液,混勻
在450nm下檢測吸光度,結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
結(jié)果計算
定量分析
所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
以玉米赤霉烯酮(ZEN)濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo),即為玉米赤霉烯酮(ZEN)濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中玉米赤霉烯酮(ZEN)濃度C(ppb)
由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋,因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。
半定量測定
目測半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
儀器半定量測定:首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行,根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。
特異性
物質(zhì) 交叉反應(yīng)
玉米赤霉烯酮………………………………………100%
玉米赤霉酮…………………………………………13%
玉米赤霉醇…………………………………………<1%
試劑盒參數(shù)
本試劑盒檢測下限為0.05ng/ml
B0吸光度最佳值應(yīng)大于1.0
試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8%,板間誤差小于15%。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。
試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0 ng/ml ~ 400ng/ml。
分析限制
玉米赤霉烯酮(ZEN)ELISA試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。
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