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玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有玉米赤霉烯酮（ZEN）偶聯(lián)抗原，加入玉米赤霉烯酮（ZEN）標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離玉米赤霉烯酮（ZEN）與微孔條上預(yù)包被的玉米赤霉烯酮（ZEN）偶聯(lián)抗原互相競爭抗玉米赤霉烯酮（ZEN）抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測，吸光值與樣品中玉米赤霉烯酮（ZEN）含量成反比，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中玉米赤霉烯酮（ZEN）的含量。  

試劑盒組成

預(yù)包被的玉米赤霉烯酮（ZEN）偶聯(lián)抗原的可拆酶標(biāo)板：1塊（12孔×8條）。

玉米赤霉烯酮（ZEN）標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），含量分別是： 0 ng/ml，0.5 ng/ml,2 ng/ml,20 ng/ml,200 ng/ml,400 ng/ml。

抗玉米赤霉烯酮（ZEN）抗體酶結(jié)合物：1瓶（6ml）。

顯色液A：1瓶（6ml）。

顯色液B：1瓶（6ml）。

終止液：1瓶（6ml），2M硫酸。

樣本-稀釋液：1瓶（10×,  6ml），用于樣品稀釋用。

濃縮洗滌液：1瓶（20×，20ml），用于洗板。

說明書一份。

操作步驟

實(shí)驗(yàn)開始前請將所有試劑于盒外充分恢復(fù)至室溫（25±2℃），時間約2小時。回溫至室溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存

注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準(zhǔn)確度。

使用后請立即將試劑放回2~8℃保存

請不要改變分析程序

請使用精確的微量移液器

操作一旦開始，請不要中斷任何程序

ELISA結(jié)果的可重復(fù)性極大程度的取決于操作程序，請嚴(yán)格按照要求操作

為避免交叉污染，每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品均應(yīng)使用不同的吸頭加樣

加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內(nèi)表面

分析步驟

預(yù)先進(jìn)行編號，標(biāo)記B0、標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測

取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存

樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（20×）稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)

在B0孔中加入50µl   0.0 ng/ ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液

在各標(biāo)準(zhǔn)孔中加入50μl的標(biāo)準(zhǔn)品溶液

在各樣品孔中加入50µl樣品溶液

在所有孔中加入50µl的抗玉米赤霉烯酮（ZEN）抗體酶結(jié)合物

輕輕晃動反應(yīng)板幾秒鐘。 

37℃溫浴30min （溫浴過程中不時輕拍反應(yīng)板，可以減少雙孔誤差）

甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完-全除去孔中液體。

反應(yīng)

洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯色液B；輕微晃動反應(yīng)板使之徹-底混勻

37℃溫浴10min

每孔中加入50µl終止液，混勻

在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。

結(jié)果計算

定量分析

所獲得的每個濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

以玉米赤霉烯酮（ZEN）濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應(yīng)點(diǎn)的橫坐標(biāo)，即為玉米赤霉烯酮（ZEN）濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中玉米赤霉烯酮（ZEN）濃度C（ppb）

由于樣品經(jīng)過了預(yù)先稀釋，因此根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。 

半定量測定

目測半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

儀器半定量測定：首先選擇一個適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)液與樣品同運(yùn)行，根據(jù)樣品與標(biāo)準(zhǔn)品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標(biāo)準(zhǔn)值。

特異性

物質(zhì) 交叉反應(yīng)

玉米赤霉烯酮………………………………………100%

玉米赤霉酮…………………………………………13%

玉米赤霉醇…………………………………………＜1%

試劑盒參數(shù)

本試劑盒檢測下限為0.05ng/ml

B0吸光度最佳值應(yīng)大于1.0

試劑盒吸光度板內(nèi)誤差小于8％，板間誤差小于15％。

用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。

試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍為0 ng/ml ~ 400ng/ml。

分析限制

玉米赤霉烯酮（ZEN）ELISA試劑盒檢測為陽性的樣品應(yīng)該用另一種方法如HPLC或GC/MS加以確證。