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豬乙型腦炎病毒 ELISA 抗體檢測試劑盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：12個月

使用意義

豬乙型腦炎間接 ELISA 抗體檢測試劑盒用于檢測豬血清中豬乙型腦炎 病毒抗體。

試劑盒組成

規(guī)格96 份/盒192 份/盒480 份/盒

JEV 抗原包被板96 孔/塊×196 孔/塊×296 孔/塊×5

樣品稀釋液30ml/瓶×160ml/瓶×1120ml/瓶×1

酶標(biāo)記物(JEV)11ml/瓶×122ml/瓶×150ml/瓶×1

陽性對照血清(JEV)1.5ml/瓶×11.5ml/瓶×14ml/瓶×1

陰性對照血清(JEV)1.5ml/瓶×11.5ml/瓶×14ml/瓶×1

底物 A 液6ml/瓶×112ml/瓶×130ml/瓶×1

底物 B 液6ml/瓶×112ml/瓶×130ml/瓶×1

終止液6ml/瓶×112ml/瓶×130ml/瓶×1

20×濃縮洗滌液30ml/瓶×150ml/瓶×1100ml/瓶×1

封板膜1 張2 張5 張

自封袋1 個2 個5 個

說明書1 份1 份1 份

操作步驟：

1. 使用前將試劑盒置于室溫 30 分鐘，待其恢復(fù)至室溫。(注： 陰、陽對照 血清不用回溫，從 4℃取出，即可使用，使用后立即放回 4℃保存)

2. 取所需用量的 JEV 抗原包被板條，設(shè)陰性及陽性對照各 2 孔，未用的板 條盡快密封，2~8℃保存。

3. 陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清 100μL；樣品孔每孔加 入稀釋后的血清樣本 100μL。

4. 輕微振蕩混勻；蓋上封板膜封板，置于 37℃環(huán)境避光反應(yīng) 30 分鐘。

5. 洗板：小心揭開封板膜，將孔內(nèi)液體甩干，加洗滌液 300μL/孔，每次浸 泡 1min ，充分洗滌 4~5 次，最后一次用吸水紙拍干。

6. 每孔加酶標(biāo)記物 100μL 。37℃環(huán)境避光反應(yīng) 30 分鐘。

7. 洗板： 同步驟 5。

8. 顯色：每孔先各加入底物 A 液 50μL ，再各加入底物 B 液 50μL ，輕輕振 蕩混勻，并在 37℃下避光反應(yīng) 15 分鐘。

9. 讀數(shù)： 每孔各加 50μL 終止液，在酶標(biāo)儀于 450nm 處測定 OD 值（在 5 分鐘內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）。

結(jié)果判定

成立條件：

陰性對照： 陰性對照孔 OD 均值≤ 0.1；

陽性對照：陽性對照孔 OD 均 值≥0.5；

計(jì)算方法：S/P 值=樣本 OD 值/陽性對照 OD 平均值

結(jié)果判定：S/P 值＜0.3 則判斷為陰性；S/P 值≥0.3 則判斷為陽性。

注意事項(xiàng)

1. 操作時必須戴手套，穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度。

2. 采集血清時應(yīng)無菌操作，要求血清清亮無溶血，避免使用嚴(yán)重溶血的血 清。

3. 用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮血清保存時間不能太久，血清解凍后應(yīng)該充 分混勻，血清稀釋后在加樣前也要混合均勻，解凍后的血清爭取一次性 檢測完畢，如需做多次檢測，建議少量分裝冷凍保存。

4. 若血清出現(xiàn)渾濁或沉淀，建議離心后取上清檢測。

5. 試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

6. 試驗(yàn)中常用到的酶標(biāo)儀、加樣器、洗板機(jī)、恒溫箱及存放試劑的冰箱等 儀器設(shè)備要定期維護(hù)和校準(zhǔn)，確保儀器設(shè)備正常使用，避免試驗(yàn)誤差。

7. 所有樣品洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

8. 微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可，未用完 的微孔板須放入有干燥劑的密封袋中保存。

9. 剩余樣品及廢棄物應(yīng)經(jīng) 121℃高壓蒸汽滅菌 30 分鐘，或用 5.0g/L 次氯酸 鈉等消毒劑處理 30 分鐘后廢棄。

10. 豬乙型腦炎病毒 ELISA 抗體檢測試劑盒不同批號試劑組分不得混用。