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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 50T草地貪夜蛾彈狀病毒探針?lè)晒釶CR試劑盒

草地貪夜蛾彈狀病毒探針?lè)晒釶CR試劑盒
  • 草地貪夜蛾彈狀病毒探針?lè)晒釶CR試劑盒
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
參考價(jià) 面議
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號(hào) 50T
  • 廠(chǎng)商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時(shí)間:2025-05-23 10:03:55瀏覽次數(shù):53評(píng)價(jià)

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同類(lèi)優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品

更多產(chǎn)品
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50T/盒
貨號(hào) XY-D-1912 應(yīng)用領(lǐng)域 化工,生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 科研 英文名稱(chēng) Spodoptera Frugiperda Rhabdovirus Probe qRT-PCR Ki
保存條件 -20℃保存 有效期 12個(gè)月
草地貪夜蛾彈狀病毒探針?lè)晒釶CR試劑盒特異性高,靶分子的引物和探針是根據(jù)草地貪夜蛾彈狀病毒 RNA 高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他生物的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

草地貪夜蛾彈狀病毒(Spodoptera Frugiperda Rhabdovirus,SfRV),是一種線(xiàn)性負(fù)義單鏈 RNA 病毒,其基因組長(zhǎng)度為 11000 nt~12000 nt,該病毒顆粒通常為180 nm~200 nm 長(zhǎng),直徑為 70 nm~80 nm 的子-彈狀。草地貪夜蛾彈狀病毒可以通過(guò)昆蟲(chóng)體液或環(huán)境中的接觸傳播,也可以通過(guò)親本進(jìn)行垂直傳播。該病毒還能夠在草地貪夜蛾的細(xì)胞系中持續(xù)感染。它作為一種能感染危害玉米、水稻等作物害蟲(chóng)的病毒引發(fā)了農(nóng)業(yè)及生物學(xué)界的關(guān)注。因此快速靈敏診斷草地貪夜蛾彈狀病毒具有重要意義。本產(chǎn)品就是以探針?lè)晒舛?RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的專(zhuān)門(mén)檢測(cè)草地貪夜蛾彈狀病毒的含內(nèi)參試劑盒。


產(chǎn)品特點(diǎn):

1.即開(kāi)即用,用戶(hù)只需要提供樣品 RNA 模板。

2.引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,分析靈敏度高,可以達(dá)到 100 拷貝/反應(yīng)。

3.提供陽(yáng)性對(duì)照,便于制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)和用作擴(kuò)增對(duì)照,排除假陰性結(jié)果。

4.含識(shí)別內(nèi)源性?xún)?nèi)參的引物和探針,便于排除 RT-PCR 假陰性結(jié)果。

5.特異性高,靶分子的引物和探針是根據(jù)草地貪夜蛾彈狀病毒 RNA 高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他生物的 RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

6.既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。定量檢測(cè)時(shí)線(xiàn)性范圍至少為 5 個(gè)數(shù)量級(jí)。

7.本產(chǎn)品足夠 50 次 20 μL 體系的探針?lè)?RT-PCR 反應(yīng)。

8.草地貪夜蛾彈狀病毒探針?lè)晒釶CR試劑盒只能用于科研。


產(chǎn)品參數(shù):

產(chǎn)品規(guī)格

50T/盒,可滿(mǎn)足一定規(guī)模的檢測(cè)需求。

檢測(cè)方法

實(shí)時(shí)熒光PCR,具有快速、準(zhǔn)確、靈敏等優(yōu)點(diǎn)。

試劑盒成分

探針?lè)?qRT-PCR 緩沖液、探針?lè)?qRT-PCR 酶混合液 v2、熒光PCR 專(zhuān)用模板稀釋液、通用內(nèi)參(1E4 拷貝/μL)、草地貪夜蛾彈狀病毒 qRT-PCR引物-探針干粉(含內(nèi)參引物探針)、草地貪夜蛾彈狀病毒 qRT-PCR陽(yáng)性對(duì)照(1E7 拷貝/μL)、使用手冊(cè)

自備試劑

樣品 RNA。

保存和運(yùn)輸

低溫運(yùn)輸,-20℃保存,保存期限為 12 個(gè)月。


使用方法:

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品(以陽(yáng)性對(duì)照 1E1-1E6 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。

1.標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6、5、4、3、2、1,0。

2.在 0 號(hào)管中加入 280 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液,35 μL 本試劑盒提供的外源性?xún)?nèi)參,震蕩一分鐘混勻。外源內(nèi)參的濃度為 1E4 拷貝/μL。

3.在各管中加入 45 μL 熒光PCR 專(zhuān)用模板稀釋液。

4.在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品。放冰上待用。

5.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)陽(yáng)性樣品,各樣品中外源內(nèi)參濃度均為 1E3 拷貝/μL。放冰上待用。如需降低外源內(nèi)參濃度,可在第 2 步時(shí)減少加入量。

二、樣品 RNA 的制備

6.如果有 N 個(gè)樣品,最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取,多出的一個(gè)是制備 PC(樣品制備陽(yáng)性對(duì)照),一個(gè)是制備 NC(樣品制備陰性對(duì)照)。可以用確認(rèn)是陽(yáng)性的樣本作為陽(yáng)性對(duì)照,用確認(rèn)是陰性的樣本作為陰性對(duì)照。

7.用自選方法純化樣品的 RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) RNA 提取試劑盒兼容,也可以選購(gòu)本公司的核酸-提取試劑。

三、Probe qRT-PCR 反應(yīng)(20 μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)

8.如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè)PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 RT-PCR 陰性對(duì)照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。如果做定性分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) RT-PCR 管,其中N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 RT-PCR 陰性對(duì)照(用水做模板), 1 個(gè)用于 RT-PCR 陽(yáng)性對(duì)照(直接用第 5 第 4 號(hào)管的陽(yáng)性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

9.在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)):

成分樣品管

N+2 個(gè)RT-PCR

陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品管

(1-6 管)

探針?lè)?qRT-PCR 緩沖液各 10 μL10 μL各 10 μL

探針?lè)?qRT-PCR 酶混合液 v2各 1 μL1 μL各 1 μL

草地貪夜蛾彈狀病毒 qRT-PCR

引物-探針混合液(含內(nèi)參引物和探針)各 4 μL4 μL4 μL

N+2 個(gè)待測(cè)樣(含內(nèi)源性?xún)?nèi)參)各 5 μL不加不加

超純水不加5 μL不加

第 5 所得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)樣品稀釋液

(含內(nèi)參,1-6 號(hào))不加不加各 5 μL(2 號(hào)樣

到 2 號(hào)管,3 號(hào)樣

 

到 3 號(hào)管…)

10.蓋上蓋子后上機(jī),按下面參數(shù)進(jìn)行 RT-PCR:

四、數(shù)據(jù)處理

11.陰性陽(yáng)性判斷:沒(méi)有 Ct 讀數(shù),或 Ct 大于 40 判為陰性結(jié)果。有 Ct 讀數(shù),Ct 值小于 40,熒光信號(hào)有對(duì)數(shù)增長(zhǎng),有典型擴(kuò)增曲線(xiàn)判為陽(yáng)性結(jié)果。每個(gè)樣本需要對(duì)FAM 通道和 Cy5 通道的結(jié)果分別進(jìn)行判定,得到兩個(gè)結(jié)果。

12.實(shí)驗(yàn)有效性判斷:如果擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照或制備陽(yáng)性對(duì)照 FAM 通道結(jié)果為陰性則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效,不需要分析數(shù)據(jù),需要分析原因,可能是操作、儀器和試劑三方面的原因,重做擴(kuò)增或制備或跟儀器和試劑廠(chǎng)家聯(lián)系。如果擴(kuò)增陰性對(duì)照或制備陰性對(duì)照 FAM 通道結(jié)果為陽(yáng)性,說(shuō)明環(huán)境污染,則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效,不需要分析數(shù)據(jù),需要分析失敗原因,直到污染消除。如果陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照正常,則進(jìn)入下一步分析樣本的有效性。

13.樣本有效性判斷:如果樣本 FAM 通道的結(jié)果為陽(yáng)性,則無(wú)論內(nèi)參通道的結(jié)果是陰性還是陽(yáng)性,樣本的結(jié)果均有效。如果樣本結(jié)果為陰性,內(nèi)參通道結(jié)果也為陰性, 則此樣品的陰性結(jié)果無(wú)效。此樣品需要重新提取核酸和進(jìn)行擴(kuò)增。

14.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,分別以陽(yáng)性對(duì)照 FAM 通道和內(nèi)參通道的 Ct 值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),陽(yáng)性對(duì)照 FAM 通道讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為斜線(xiàn),r2 必須大于 0.95,內(nèi)參通道讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為一條跟 X 軸平行的橫線(xiàn)。再以待測(cè)樣品的 Ct 值從陽(yáng)性對(duì)照FAM 通道讀數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上推算出樣品 RNA 濃度的 log 值,再推算出其濃度。

15.如果用于定性實(shí)驗(yàn),對(duì)待測(cè)樣品,如果其 FAM 通道的 Ct 沒(méi)有讀數(shù)、或 Ct 大于或等于 40 則均為陰性,如果小于 40 則為陽(yáng)性。對(duì)任何 FAM 通道結(jié)果為陰性的待測(cè)樣本,如果其對(duì)應(yīng)的內(nèi)參通道也為陰性,則此樣品的陰性結(jié)果無(wú)效,此樣品需要重復(fù)實(shí)驗(yàn)。


選擇我們的草地貪夜蛾彈狀病毒探針?lè)晒釶CR試劑盒,就是選擇精準(zhǔn)、高效、可靠的檢測(cè)方案,為您的科研實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航!

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