校準PE紫外分光光度計需要遵循一系列詳細且系統(tǒng)的步驟，以確保儀器的準確性和可靠性。以下是具體的校準步驟：
一、校準前的準備工作
1.儀器檢查與清潔
確保紫外分光光度計安裝在穩(wěn)定、干燥、低溫且無振動的環(huán)境中，周圍無強磁場干擾和腐蝕性氣體。
檢查儀器外觀是否有損壞，各部件連接是否正常，如比色皿架、電源線等。
使用干凈的擦鏡紙或柔軟的布輕輕擦拭儀器的外殼、樣品室、比色皿等，去除灰塵、油污和其他雜質(zhì)。
2.試劑準備
根據(jù)校準需求，準備一系列濃度已知的標準溶液，用于波長校準和吸光度校準。例如，常用的重鉻酸鉀溶液可用于可見光區(qū)的校準，硝酸鈉溶液可用于紫外光區(qū)的校準。
準備好純?nèi)軇┳鳛榭瞻自噭?，如蒸餾水、乙醇等，其純度應(yīng)符合分析要求。
3.儀器預(yù)熱
打開紫外分光光度計的電源開關(guān)，讓儀器預(yù)熱一段時間，通常預(yù)熱10~30分鐘，使儀器的光源、檢測器等部件達到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。
二、波長校準
1.選擇標準溶液
選擇合適的具有已知最大吸收波長的標準溶液，將其倒入比色皿中，用擦鏡紙擦干比色皿外壁，避免手上的油污對比色皿透光性產(chǎn)生影響。
將裝有標準溶液的比色皿放入樣品室中的比色皿架上，注意放置方向要正確，使光路通過溶液。
2.設(shè)置參數(shù)
在儀器的操作界面上，選擇光譜掃描模式，設(shè)置掃描的波長范圍應(yīng)包括標準溶液的最大吸收波長，掃描速度適中，采樣間隔一般為1nm或更小。
啟動掃描程序，儀器將自動繪制出標準溶液的吸收光譜曲線。
3.調(diào)整與記錄
觀察吸收光譜曲線，找到最大吸收波長對應(yīng)的波峰位置。
如果該波峰位置與標準溶液的已知最大吸收波長不一致，說明儀器的波長存在偏差。此時，需要通過儀器上的波長調(diào)節(jié)按鈕或相關(guān)操作菜單，對波長進行微調(diào)，使測量得到的最大吸收波長與標準值相符。
反復(fù)調(diào)整和測量，直到波長誤差在允許范圍內(nèi)，一般要求波長準確度誤差不超過±0.5nm。
三、吸光度校準
1.空白校正
取出裝有標準溶液的比色皿，將裝有純?nèi)軇┑谋壬蠓湃霕悠肥抑械膮⒈瘸匚恢?，關(guān)上樣品室蓋。
在操作界面上選擇吸光度測量模式，點擊“調(diào)零”或“空白校正”按鈕，儀器將以純?nèi)軇榭瞻?，將吸光度值調(diào)整為零。這樣可以消除溶劑本身對光的吸收以及比色皿等因素對測量結(jié)果的影響。
2.標準溶液測量
將裝有標準溶液的比色皿放入樣品室中的樣品池位置，關(guān)上樣品室蓋。
如果實際測量值與理論值存在偏差，說明儀器的吸光度存在誤差。此時，需要通過儀器上的吸光度調(diào)節(jié)按鈕或相關(guān)操作菜單，對吸光度進行校準，使測量值與理論值相符。
可以多次重復(fù)測量和校準，直到吸光度誤差在允許范圍內(nèi)，一般要求吸光度準確度誤差不超過±0.005A。
四、性能檢查與驗證
1.重復(fù)性檢查
使用同一標準溶液，在相同的條件下，連續(xù)多次測量其吸光度值，計算測量結(jié)果的相對標準偏差（RSD）。一般來說，RSD應(yīng)小于0.5%，以證明儀器的重復(fù)性良好。
2.線性范圍檢查
配制一系列不同濃度的標準溶液，按照從低到高的順序依次測量其吸光度值。
然后以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線。觀察標準曲線的線性關(guān)系是否良好，相關(guān)系數(shù)應(yīng)大于0.999，以證明儀器在測量范圍內(nèi)的線性關(guān)系正常。
五、注意事項
1.校準環(huán)境應(yīng)保持穩(wěn)定，避免溫度、濕度等環(huán)境因素對校準結(jié)果產(chǎn)生影響。
2.使用標準物質(zhì)時應(yīng)確保其有效期內(nèi)、儲存條件正確，以保證其準確性。
3.校準過程中應(yīng)遵循操作規(guī)程，避免誤操作導(dǎo)致儀器損壞或校準結(jié)果失真。
4.校準結(jié)果應(yīng)及時記錄并保存，以便后續(xù)分析和比對。
通過遵循以上步驟和注意事項，可以確保PE紫外分光光度計的準確性和可靠性，為實驗結(jié)果提供有力的保障。
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