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鄭州華圖生物科技有限公司

我公司推出氣相色譜-串聯質譜法測定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

時間:2010-3-11閱讀:3863

氣相色譜-串聯質譜法測定血液中乙基葡萄糖醛酸苷

 

 

 

  

 


 

目的建立血液中乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronideEtG)的氣相色譜-串聯質譜(GC-MS/MS)測定方法。

方法 血液用于乙腈沉淀蛋白,離心后,將上清液轉移吹干,殘留物經N,O-雙(*基硅烷基)三氟乙酰胺衍生化,用GC-MS/MS進行檢測。結果 血液中EtG的檢出限為0.05ul/ml,線性范圍為0.1-10ul/mlr=0.9999)。對送檢案例血液檢材進行EtG檢測,效果良好。

結論 本方法適用于血液中EtG的檢測。

關鍵詞:法醫毒理學;血液;乙基葡萄糖醛酸苷;氣相色譜儀-串聯質譜法

 

酒后駕車是一個世界性的交通安全問題。我國每年因交通事故死亡中約25%-30%與酒后駕車有關。由于乙醇在體內代謝較快,一般飲酒后6-8h體內已檢測不到乙醇。對于疑酒后駕車肇事后逃逸者,在一定時間后體內檢測不到乙醇,因此需要尋找新的途徑證明肇事者是否為酒后駕車。

乙醇進入人體后,有一部分乙醇與尿嘧啶核苷-5-二磷-葡萄糖醛酸結合成乙基葡萄糖醛酸苷(ethyl glucuronideEtG)由于其比原體乙醇的半衰期長,當血液中乙醇濃度低于檢測*,體內仍可在一定時間內檢出EtG。因此血液中EtG的檢測及評價越來越為人們所重視 ,特別是酒后駕車肇事逃逸案件中,抽血與事故發生時間隔過長,血液中往往測不出乙醇成分,但可以檢測血液中EtG{1-2}

血液中EtG的測定方法主要有液相色譜-串聯質譜法(LC-MS/MS)和氣相色譜-質譜聯用發(GC-MS)。LC-MS/MS是zui常用的檢測方法{3-7}GC-MS測定中雜質干擾較多,對樣品前處理要求較高,需要固相萃取,樣品處理時間長{8-12},而氣相色譜-串聯質譜法(GC-MS/MS)可以克服這些缺點{13-14}

本研究建立了血液用乙腈沉淀蛋白,經衍生化后用GC-MS/MS檢測EtG的方法

1 材料與方法

   1.1 儀器與試劑

           氣相色譜(美國Agilent公司)與串聯質譜(美國Waters公司)聯用儀,離心機(美國Eppendorf公司),EtGEtG-d5美國Cerilliant公司N,O-雙(*基硅烷基)三氟乙酰胺-*基氯硅烷(BSTFA-TMCS,體積比為991)(美國Sigma-Aldrich公司),其余試劑均為分析純。

 

1.2溶液配制

         EtG溶液:將100ug/mlEtG標準甲醇溶液用甲醇稀釋得20.0ug/mlEtG工作液。 內標EtG-d5工作液。

1.3樣品前處理:

取血液0.10ml置于1.5ml離心管中,加入5ul內標EtG-d5工作液和0.90ml腈,渦旋混合,以離子半徑6cm10000r/min,離心5min,轉移上清液另一離心管中,6cm10000r/min,離心5min,轉移上清液另一離心管中,60℃水浴中空氣流下吹干,殘留物中加入BSTFA-TMCS(66ul)和吡啶(33ul),90℃干燥箱中進行衍生化反應30min,取出。冷卻后1ul進樣。

1.4儀器分析:

1.4.1氣相色譜柱條件

         色譜柱:HP-1MS毛細管柱(30mX0.25mm,0.1um)。柱溫:初溫100℃保持1min,以8/min程序升溫205℃,再以30/min程序升溫280℃保持3min。進樣口溫度: 250℃。分流比為101.載氣:氦氣,流速為1ml/min

1.4.2質譜條件

離子源(EI源)溫度220℃,接口溫度300℃,碰撞氣為氬氣。正離子多反應監測模式檢測,MRM定性離子對:EtG 261>143(CE=5),261>73(CE=20);EtG-d5266>143(CE=5),266>73(CE=20);261>143(EtG)266>143(EtG-d5作為定量離子對。

2  案例應用

   某司機于某日上午700許發生交通事故后,駕車逃離現場,當日晚2100許投案。靜脈抽血送檢,其時距交通肇事時間為14h,結果未檢出乙醇成分。應用本方法分析,結果檢出EtG成分,為委托單位辦案提供了有力的證據。

3   結論

        本方法建立了一種有機溶劑沉淀蛋白,經衍生化后,用GC-MS/MS檢測血液中EtG的方法,并成功應用于案例。該方法簡便、快速,適用于實際檢案工作。

 

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