CheKine™ 葡萄糖 - 6 - 磷酸(6PG)含量檢測試劑盒(微量法)
一、試劑盒概述
CheKine™ 葡萄糖 - 6 - 磷酸(6PG)含量檢測試劑盒(微量法)是一種用于檢測生物樣本中 6PG 含量的工具。6PG 是糖酵解和磷酸戊糖途徑的關鍵中間產物,在糖代謝中具有重要作用。通過檢測 6PG 含量,可以深入了解細胞的糖代謝狀態,為代謝研究、疾病診斷等提供重要數據。
二、檢測原理
在該試劑盒中,6PG 在 6 - 磷酸葡萄糖脫氫酶的催化下與 NADP?反應生成 6 - 磷酸葡萄糖酸和 NADPH。NADPH 在 1 - mPMS 的作用下使 WST - 8 顯橙黃色,且顏色深淺與 6PG 含量成正比。通過測定 450 nm 處的吸光值,可準確計算 6PG 含量。
三、實驗步驟
(一)樣本準備
- 組織樣本 :稱取適量組織,用預冷生理鹽水洗滌,按質量體積比加入裂解液,冰上勻漿后離心取上清。
- 細胞樣本 :收集細胞,生理鹽水洗滌后,加入裂解液吹打混勻,冰上裂解后離心取上清。
- 液體樣本 :血清、血漿樣本直接離心取上清;尿液等其他液體樣本過濾去除雜質后即可檢測。
(二)試劑準備
- 試劑配制 :按說明書配制工作液、顯色液和酶溶液,使用前充分混勻。
- 試劑預冷 :將配制好的試劑置于冰上預冷,減少非特異性反應。
(三)反應體系設置
- 體系構建 :在微量反應板中依次加入樣本、工作液、顯色液和酶溶液,輕輕混勻。
- 反應條件 :37℃孵育 30 分鐘左右,使反應充分進行。
(四)檢測
- 吸光度檢測 :使用酶標儀在 450 nm 波長下測定反應體系的吸光值。
- 標準曲線繪制 :用標準品繪制標準曲線,以確定樣本中 6PG 的含量。
四、實驗結果解讀
- 含量計算 :根據吸光值和標準曲線計算 6PG 的含量。
- 結果分析 :6PG 含量可反映糖代謝狀態,如在糖尿病等代謝疾病中,6PG 含量可能異常。
- 注意事項 :嚴格控制反應條件,避免交叉污染,設置對照組以確保結果的可靠性。
五、應用領域
該試劑盒適用于多個領域,包括代謝研究、疾病研究、食品分析和生物技術等,可用于檢測動植物組織、細胞、血清、血漿和尿液等樣本中的 6PG 含量,助力科研和實際應用。
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