目錄:合肥恩派爾貿(mào)易有限公司>>Abnbio感受態(tài)細(xì)胞>>表達(dá) 感受態(tài)細(xì)胞>> ABG222-50JM109(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50X100ul |
|---|---|---|---|
| 貨號 | ABG222-50 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 環(huán)保,食品/農(nóng)產(chǎn)品,化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 感受態(tài)細(xì)胞 |
基因型
endA1 recA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 (rk-,mk+)relA1supE44D(lac-proAB) [F? traD36 proAB laqI qZΔM15](DE3)
簡要說明
JM109(DE3)菌株來源于JM109，用于高效表達(dá)克隆于含有噬菌體T7啟動子的表達(dá)載體(如pET系列)的基因。λ噬菌體DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶，該區(qū)整合于JM109的染色體上，所以稱為JM109(DE3)?？赏瑫r表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)。JM109(DE3)菌株不可用于藍(lán)白斑篩選試驗。JM109(DE3)感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率高于108 cfu /μg DNA。
操作說明
1、JM109(DE3) 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，待菌塊融化，加入目的DNA并用手撥EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌2YT或LB培養(yǎng)基，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
注意事項
1、感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少最終用于涂板的菌量。
3. 誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-2 mM均可）。
4. 為獲得需要量的蛋白，最佳誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
4
化工儀器網(wǎng)