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巰基偶聯瓊脂糖凝膠

MCE 國際站：High-Affinity Iodoacetyl Agarose

品牌：MedChemExpress (MCE)

存儲條件：2-8°C，禁止凍結，2 年有效

簡介：MCE High-Affinity Iodoacetyl Agarose 通過化學方法共價偶聯了碘乙酸衍生物，能夠簡單、快速地結合含巰基的蛋白、多肽等生物配體并形成穩定的巰醚鍵，配體固定后可進行親和純化實驗。

概述：MCE High-Affinity Iodoacetyl Agarose 以高度交聯的 4% 瓊脂糖凝膠為基質，通過化學方法共價偶聯了碘乙酸衍生物，能夠簡單、快速地結合含巰基的蛋白、多肽或其他生物配體并形成穩定的巰醚鍵，配體固定后可進行親和純化實驗。本產品載量高，每 1 mL 瓊脂糖凝膠可固定超過 1 mg 的含巰基七肽。本品儲存于 20% 乙醇中，每 1 mL 總體積中 0.5 mL 為凝膠。使用前，需將 High-Affinity Iodoacetyl Agarose 充分重懸混勻后吸取。

描述：

MCE 高親和力碘乙酰瓊脂糖是一種 4% 高度交聯的瓊脂糖試劑，與碘乙酸衍生物偶聯，可與含巰基的肽、蛋白質或其他配體的游離巰基發生特異性反應，形成穩定的硫醚鍵。該瓊脂糖非常適合結合含巰基的肽或蛋白質，以便進行后續的親和純化。1 mL 瓊脂糖可固定約 1 mg 含 7 個氨基酸的巰基肽。

操作說明：1. Buffer 的準備建議用高純水配制 Buffer，且配制后通過 0.45 μm 濾膜過濾除菌。2. 偶聯含巰基樣品：(1) 樣品處理：用偶聯緩沖液溶解含巰基的蛋白、多肽或其他生物配體，使其終濃度大約為 1 mg/mL。(2) 裝柱：用偶聯緩沖液沖洗柱底篩板，確保柱底篩板上無氣泡，關閉柱底出口，并在柱底部留出 1-2 cm 的偶聯緩沖液。將 High-Affinity Iodoacetyl Agarose 懸浮混勻并取適量加入柱管中，讓其緩慢沉降到管底。(3) 平衡：使用 3 倍柱體積的偶聯緩沖液平衡層析柱，讓緩沖液緩慢流出，流速大約為 1 mL/min。重復上述操作 2 次以上。(4) 偶聯：蓋住底蓋，加入樣品，讓溶液進入柱床。蓋住頂蓋并將層析柱放置在搖床上，室溫孵育 30 分鐘。偶聯好后，固定層析柱于鐵架臺，取下底蓋，讓溶液流出，填料沉降到底部。注：1 mL 瓊脂糖凝膠加入大約 1 mL 樣品。(5) 洗雜：用 3 倍柱體積的偶聯緩沖液沖洗柱子，流速大約為 1 mL/min。收集流出液，測其 OD280 值，并與偶聯前相比較，判斷偶聯效率。(6) 封閉：蓋住底蓋，加入與柱體積相同的封閉緩沖液。蓋住頂蓋并將層析柱放置在搖床上，室溫孵育 30 分鐘。封閉好后，固定層析柱于鐵架臺，取下底蓋，讓溶液流出，填料沉降到底部。(7) 儲存：如果立即使用，直接進入抗體純化步驟。如果不立即使用，使用 3 倍柱體積的結合/洗滌緩沖液洗滌，再加入 1 倍柱體積的存儲緩沖液 2-8°C 保存，嚴禁凍結。3. 過柱純化抗體：(1) 平衡：使用至少 5 倍柱體積的結合/洗滌緩沖液平衡層析柱，讓緩沖液緩慢流出，填料沉降到底部。(2) 抗體結合：加入抗體樣品，讓抗體樣品緩慢流出，流速大約為 0.5 mL/min，收集流出液。如有必要，可以重復或循環上樣以提高得率。(3) 洗雜：用 30-50 倍柱體積的結合/洗滌緩沖液沖洗柱子，直到 OD280 紫外吸收達到一個穩定的基線，流速大約為 1.5 mL/min，收集流出液。(4) 洗脫：洗雜完畢后，用 5-10 倍柱體積的洗脫緩沖液洗脫柱子（可通過測量 OD280 監測蛋白洗脫情況。），流速大約為 1 mL/min，收集洗脫液，并立刻加入中和緩沖液（約 1/10 洗脫液體積）調節 pH。(5) SDS-PAGE 檢測：將純化得到的抗體樣品（包括流出組分、洗雜部分和洗脫部分）以及原始樣品使用 SDS-PAGE 檢測純化效果。4. 填料再生與儲存使用 5 倍柱體積的結合/洗滌緩沖液洗滌，加入 1 倍柱體積的存儲緩沖液 2-8°C 保存，嚴禁凍結。

注意事項：1. 請勿干燥或冷凍本產品，以免引起效價降低，降低純化效率。2. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。3. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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