可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶（Soluble acid invertase, S-AI）試劑盒說(shuō)明書(shū)

分光光度法 50 管/24 樣

可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶 蔗糖

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)最適 pH，Ivr 分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。

AI 的最適pH 為 3～5。AI 分為可溶性AI(S-AI)和細(xì)胞壁不溶性AI（B-AI）兩種類型。S-AI 主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中，最適 pH 為 4.5~5.0（酸性），通過(guò)降解液泡中蔗糖，調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實(shí)內(nèi)糖類的積累。

測(cè)定原理：

S-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與 3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在 510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi) 510nm 光吸收增加速率與S-AI 活性成正比。

組成：

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 25ml 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃保存;

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1ml 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

粗酶液提取提取：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟和加樣表：

混勻， 37℃準(zhǔn)確水浴 30min 后，95℃水浴 10min（蓋緊，以防水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變）

混勻，95℃水浴 10min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻， 510nm 處，蒸餾水調(diào)零，記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定(計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù))，ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照

S-AI 活性計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 0.0016x -0.001；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/ml），y 為吸光值。

按蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：37℃每mg 蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI 活性（μg/min/mg prot）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr

按鮮重計(jì)算：

單位的定義：37℃每g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

S-AI 活性（μg/min/g 鮮重）＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =20.8×(ΔA +0.001) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，30min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

可溶性酸性轉(zhuǎn)化酶 蔗糖