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產品簡介：

cccDNA 是乙肝病毒前基因組 RNA 和 mRNA 合成的原始模板，雖然其含量較少，每個肝細胞內只有約 5～ 50 個拷貝，但對乙肝病毒的復制以及感染狀態的建立具有十分重要的意義。HBV cccDNA 持續存在于慢性乙肝的整個自然史中，即使在有 HBV 病毒清除的血清學證據的患者當中也不例外。只要有 cccDNA 存在，HBV 的復制就不會停止。只有清除了細胞內的 cccDNA，才能徹-底消除乙肝患者病毒攜帶狀態，是抗病毒治療的目標。

本試劑盒適用于檢測血清等樣本中的乙型肝炎病毒 cccDNA，用于乙型肝炎病毒 cccDNA 感染的輔助診斷。

產品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經過嚴格的質量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信。

二、高靈敏度

產品經過不斷優化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的乙型肝炎病毒ccc DNA核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經過多種樣本的檢測驗證，適用于血清等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業的研發團隊可為您提供個性化的定制服務，根據您的特殊需求進行產品優化和調整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產品線

除了乙型肝炎病毒ccc DNA熒光PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產品參數：

產品規格

50T/盒，可滿足一定規模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優點。

適用儀器

ABI7500、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

無菌-注射器抽取被檢者靜脈血 2mL，注入無菌離心管。

保存和運輸

采集或處理好的樣品在 2℃~8℃條件下保存應不超過 24 h；若需長期保存，應放置-70℃以下保存，凍融不超過 3 次。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區）

1.1樣本前處理

2000rpm 離心 5min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2核酸提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產的核酸-提取或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提取，請按照試劑說明書進行操作。

2.試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑HBV-cccDNA 反應液酶液

用量（樣本數為 N）19μL1μL

將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中，20μL /管。

3.加樣（樣本處理區）

將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 5μL，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻， 短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25μL；

熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請勿選擇

ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3推薦循環參數設置：

步驟循環數溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃2min否

245 cycles95℃15sec否

60℃30sec是

5.結果分析判定

5.1結果分析條件設定（請參照各儀器使用說明書進行設置，以分析 ABI7500 儀器為例）

反應結束后自動保存結果，根據分析后圖像調節 Baseline 的 Start 值、End 值以及 Threshold 值（用戶可根據實際情況自行調整，Start 值可設在 3～15、End 值可設在 5～20，使閾值線位于擴增曲線指數期，陰性質控品的擴增曲線平直或低于閾值線），點擊 Analyze 自動獲得分析結果。

5.2結果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤40，且曲線有明顯的指數增長曲線； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>40 或無 Ct 值。

如果把本試劑盒用于定量檢測，則陽性質控做稀釋標曲，以陽性質控濃度的 log 值為橫軸，以 CT 值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的CT 值從標準曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，再推算出其濃度。

5.3質控標準

陰性質控品：無特異性擴增曲線或無 Ct 值顯示；

陽性質控品：擴增曲線有明顯指數增長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

6.檢測方法的局限性

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

3.陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

5.不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

6.試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

7.本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產品僅供科研。

選擇我們的乙型肝炎病毒ccc DNA熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！