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產品簡介：

本試劑盒適用于動物組織以及食品、飼料等樣本中鹿源性成分的檢測。檢測結果僅供參考。

產品特點：

一、嚴格的質控體系

所有試劑盒從原料到成品都經過嚴格的質量控制，確保每一盒試劑盒都具有穩定可靠的質量，讓您的檢測結果更可信。

二、高靈敏度

產品經過不斷優化，具有出色的靈敏度，能夠檢測到極微量的鹿源性成分核酸，不放過任何潛在的感染風險。

三、便捷操作

綜合各項指標特性，研發出操作便捷的試劑盒。從樣本制備到結果分析，每一步都有清晰的操作指南，即使是新手也能輕松上手。

四、多樣的檢測驗證樣本

該試劑盒經過多種樣本的檢測驗證，適用于動物組織以及食品、飼料等多種常見樣本，滿足不同的檢測需求。

五、個性化定制服務

專業的研發團隊可為您提供個性化的定制服務，根據您的特殊需求進行產品優化和調整，為您提供更貼合實際的檢測方案。

六、豐富的產品線

除了鹿源性成分（Deer）熒光PCR檢測試劑盒，我們還提供Elisa試劑盒以及其它快檢試劑盒，滿足您在不同領域的檢測需求。

七、完善的售前售后服務

我們擁有完善專業的售前售后服務團隊，在您購買前為您提供詳細的產品咨詢和技術支持，購買后為您解決使用過程中遇到的任何問題，讓您無后顧之憂。

產品參數：

產品規格

50T/盒，可滿足一定規模的檢測需求。

檢測方法

實時熒光PCR，具有快速、準確、靈敏等優點。

適用儀器

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

標本采集

取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，轉至含 1.5mL 無菌生理鹽水的潔凈離心管送檢。

保存和運輸

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應采用 0℃冰壺。

使用方法：

1.樣品處理（樣本處理區）

1.1參照 SN/T2980-2011 標準的提取方法，如下：

1.1.1試劑配置

1)1mol/L Tris-Cl（pH8.0）：稱取 Tris 121.1g，加入 ddH2O 800mL 溶解，冷卻至室溫后弄 3M 濃鹽酸調 PH 至 8.0，加 ddH2O 定容至 1L，分裝滅菌。

2)CTAB 裂解液：800mLddH2O 加入 40.95g NaCl，10g CTAB（十六烷基三甲基溴-化銨）；完-全溶解后加入 1mol/L Tris-Cl（pH8.0）50mL，0.5mol/L EDTA

（pH8.0）20mL，磁力攪拌器劇烈攪動拌用氫氧化鈉調節 pH 至 8.0，水定容至1L，分裝滅菌；

1.1.2DNA 提取

取 100mg 左右樣品于 1.5mL 離心管中，加入 600-800μL 預冷的 CTAB 裂解液， 65℃水浴 30min，每隔 10min，振蕩混勻一次；100℃沸水浴 5min；12000r/min離心 5min，吸取上清液至一新的離心管中，加 400μL 氯仿+異戊醇混合液（體積比 24：1），充分混勻后 12000r/min 離心 10min，吸取上清液至新的離心管中，加0.8 倍體積的異丙醇，-20℃下沉淀DNA 30min；12000r/min 離心10min，棄去上清液；75%乙醇輕柔地洗滌沉淀一次，12000r/min 離心 8min，棄液體， 晾干；加入 100μL 1xTE，充分溶解沉淀;

1.2核酸稀釋（油脂類飼料不必進行此步驟）

提取的 DNA 用紫外分光光度計進行濃度測定，取 5μL 提取好的 DNA，1mL ddH2O，用 ddH2O 做對照，測定 260nm 和 280nm 的吸光度 A260 和 A280，DNA 的濃度 c=A260x10μg/μL（當 A260/A280 比值在 1.7~1.9 之間時，DNA 模版純度適宜擴增）。

2.試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；反應管數每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

試劑Deer 反應液酶液

用量20μL1μL

3.加樣（樣本處理區）

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4.PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道

（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇ROX 參比熒光。

4.3推薦循環參數設置：

步驟循環數溫度時間收集熒光信號

11 cycle95℃10min否

240 cycles94℃15sec否

55℃30sec是

結果分析判定

5.1結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

5.2判斷

a)檢測通道 Ct 值≤30，有 FAM 熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線，判斷樣品為陽性。

b)當 30<Ct 值≤35 時，且有典型的擴增曲線時，則需重復實驗。再次擴增后檢測體系的Ct 值仍≤35，且有典型的擴增曲線，則判定該樣品含有相應的動物源性成分。當再次擴增后，檢測體系 Ct 值＞35，或無典型的擴增曲線，則判定該樣品不含相應的動物源性成分。

6.質控標準

a)空白對照：無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現典型的擴增曲線。

b)陰性對照：無FAM 熒光信號檢出或 Ct 值≥35，未出現典型的擴增曲線。

c)陽性對照：有 FAM 熒光信號檢出，并出現典型的擴增曲線，Ct 值＜30。

d)以上應同時滿足，否則本次實驗無效。

7.檢測方法的局限性

7.1樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關；

7.2樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現假陽性結果；

7.3陽性對照、擴增產物泄漏，會導致假陽性結果；

7.4病原體在流行過程中基因突變、重組，會導致假陰性結果；

7.5不同的提取方法存在提取效率差異，會導致假陰性結果；

7.6試劑運輸，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降，出現假陰性或定量檢測不準確的結果；

7.7本檢測結果僅供參考，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

注意事項：

1.所有操作嚴格按照說明書進行；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化，完-全混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存；

4.反應中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服；

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待，并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。

9.本產品僅供科研。

選擇我們的鹿源性成分（Deer）熒光PCR檢測試劑盒，就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！