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產品簡介：

蛋白質定量是蛋白質研究中的一項基礎性工作，有多種方法可以測定蛋白質的濃度，其中就包括 Biuret 雙縮脲法。其原理是在強堿性溶液中，雙縮脲與CuSO4 反應形成紫色絡合物，其顏色的深淺與蛋白質濃度成正比，而與蛋白質分子量及氨基酸組成無關，故可用來進行蛋白質定量檢測。雙縮脲法反應的示意圖如下：

產品特點：

1.即開即用，用戶只需要提供樣本。

2.檢測跟蛋白質分子量及氨基酸組成無關，只能濃度相關。

3.一步法操作，操作簡單快速，只需要 20 分鐘，干擾因素少。但硫酸銨和 Tris

和某些氨基酸會干擾。

4.該方法適用于蛋白質濃度較高的樣品，尤其是動物材料。

5.起始材料可以是實體動物或植物組織、懸浮的微生物或液體樣本。

6.可測的蛋白質濃度范圍為 1-20 mg/mL，靈敏度較低，適合測定血液中蛋白的濃度（蛋白質濃度為 60-80 mg/mL，適當稀釋后適合用本方法測定）。

7.本產品足夠 50 次體積為 1 mL 比色皿檢測，或 150 次體積為 300 ?L 的

96 孔板檢測。

8.蛋白濃度測試試劑盒（Biuret 雙縮脲法）只能用于科研。

產品參數：

產品規格

保存和運輸

常溫運輸和保存，但牛血清白蛋白標準品需要低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

蛋白提取液（不得含有硫酸銨和Tris）、蒸餾水、PBS 或生理鹽水

使用方法：

一、樣本蛋白提取

9.對于實體組織樣本：按照組織質量（g）：自備蛋白提取液體積（mL）為 1： 5~10 的比例將組織樣品加入到蛋白提取液中（0.1 g 組織需要 1 mL 蛋白提取液），冰浴勻漿，10000 rpm 4℃離心 10 分鐘，取上清待測。由于動物組織的蛋白濃度常常較高，故最好預實驗確定稀釋多少倍后蛋白質的濃度才會在本試劑盒的線性范圍。

10.對于細菌真菌樣本：按照細胞數量（1E4 個）：自備蛋白提取液體積（mL） 為 500~1000：1 的比例將細胞和蛋白提取液混合（500 萬細胞需要加入 1 mL 蛋白提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300 w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3 分鐘），然后 8000×g 4℃離心 10 分鐘，取上清置于冰上待測。

11.對于液體樣品，無需進行額外處理，可直接進行后續測定步驟。

二、蛋白濃度測定（1 mL 比色皿法）

12.準備 N+2 個 1.5 mL EP 管，N 個用于待測樣品、1 個用于標準品，1 個用于空白對照。

13.按下表在各管中加入各成分：

成分N 個樣本管標準管空白管

雙縮脲法蛋白定量溶液A各 600 μL600 μL600 μL牛血清白蛋白標準品不加300 μL不加2 mg/mL

N 個待測樣本各 300 μL不加不加自備蒸餾水不加不加300 μL

總體積900 μL900 μL900 μL

14.混勻后室溫靜置 15 分鐘。

15.測定 540 nm 處的吸光度。

三、蛋白濃度測定（0.3 mL 96 孔板酶標儀檢測法）

16.在 96 孔板中的 N+2 個對應孔中，預留 N 個用于待測樣品、1 個用于標準品，1 個用于空白對照。

17.按下表在各孔中加入各成分：

成分N 個樣本孔標準孔空白孔

雙縮脲法蛋白定量溶液A各 200 μL200 μL200 μL

牛血清白蛋白標準品

2 mg/mL不加100 μL不加

N 個待測樣本各 100 μL不加不加

自備蒸餾水不加不加100 μL

總體積300 μL300 μL300 μL

18.混勻后室溫靜置 15 分鐘。

19.測定 540 nm 處的吸光度。所得標準品光吸收四、蛋白濃度計算

20.組織樣品：蛋白質濃度（mg/g 鮮重）=C 標÷(A 標－A 空)×(A 樣-A 空)×V總÷W 樣品

說明：C 標=標準品的濃度=2 mg/mL，A 標=標準品的光吸收值，A 空=空白管的光吸收值，A 樣=樣本管的光吸收值，V 總=樣本總體積mL，W 樣品

=樣品鮮重 g。

21.細胞樣品：蛋白質濃度（mg/1E4cell）=C 標÷(A 標－A 空)×(A 樣－A空)×V 總÷Q 細胞相對數

22.說明：Q 細胞相對數=細胞總數/1E4

23.液體樣品：蛋白質（mg/mL）=C 標÷(A 標－A 空)×(A 樣－A 空)。

選擇我們的蛋白濃度測試試劑盒（Biuret 雙縮脲法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！