目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 蛋白濃度測定試劑盒（BCA 超敏法）
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 5KU |
|---|---|---|---|
| 貨號 | XY-D-1599 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
| 主要用途 | 科研 | 英文名稱 | BCA |
| 保存條件 | -20℃ | 有效期 | 12個月 |
產品簡介：
本產品是在 BCA 法蛋白定量試劑盒基礎上改進的超敏蛋白定量試劑盒，尤其適合對低濃度的蛋白質溶液進行定量分析。其原理是蛋白質分子在堿性條件下將二價 Cu 離子還原為一價 Cu 離子 (雙縮脈反應) ，一個一價 Cu 離子再與二個 BCA 分子鰲合產生一種在吸收波長為 562 nm 的紫色水溶性產物，根據紫色水溶性產物的濃度反推出蛋白質的濃度。BCA 法原理示意圖如下：
產品特點：
1.超敏感，最-低檢測濃度為 0.5 μg/mL。
2.線性范圍在 0.5～20 μg/mL，尤其適用于低濃度的樣品。
3.對大多數離子型和非離子型去污劑不敏感，但對 Cu 的還原劑和螯合劑敏感。
4.比 Lowry 法更加簡單快捷，45 分鐘內完成測定。
5.試劑穩定，但工作液 1 天內有效。
6.終產物穩定，檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍法蛋白定量。
7.最短可以檢測雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質，而 Bradford 法需要一定大小的蛋白質。
8.本產品不能用于測定含有DTT 等還原劑的蛋白溶液。
9.蛋白濃度測定試劑盒（BCA 超敏法）只能用于科研。
產品參數：
產品規格
| 成分 | 規格 | 包裝 |
超敏 BCA 蛋白定量溶液A | 50mL | 60 mL 本色瓶 |
超敏 BCA 蛋白定量溶液A | 50ml | 60 mL 本色瓶 |
| 超敏 BCA 蛋白定量溶液A | 2ml | 2 mL 棕色管 |
牛血清白蛋白(BSA)標準品 （2 mg/mL） | 1ml | 1.5 mL 本色管 |
| 使用手冊 | 1份 | 1 份 |
保存和運輸
常溫運輸和保存，但 BSA 標準品需要低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。
自備試劑
樣品緩沖液
使用方法：
1. 用合適的方法制備待測蛋白樣品，并把蛋白質溶解在合適的樣品緩沖液中。本檢測方法受待測樣品中螯合劑和還原劑的影響，所以需確保待測蛋白溶液中 EDTA 的終濃度不高于 10 mM、二硫蘇糖醇不高于 1 mM、β-巰基乙醇不高于 1 mM，沒有任何 EGTA。如果達不達上述要求，則需要稀釋樣品，使其濃度降低到上述濃度之下。
2.將本試劑盒提供的 BSA 標準品（2 mg/mL）10 μL 和 490 μL 自備的樣品緩沖液（用于溶解待測樣品的溶液）混合，得到 500 μL 濃度為 0.04 μg/μL 的 BSA工作液，放冰上待用，用于制備標準曲線。上述量足夠一次實驗使用。此 BSA 工作液每次實驗均需要新鮮配制。
3.配制超敏 BCA 工作液：先計算一次檢測所需 BSA 工作液的體積。如果有 N 個樣品，每個樣品只做一次重復，再加上 7 個標準曲線樣品，一般多準備 10%的量， 故一次檢測所需 BSA 工作液的體積為：0.15 mL×（N+7）×110%。配制時將超敏型 BCA 蛋白定量溶液A、超敏型 BCA 蛋白定量溶液B 和超敏型 BCA 蛋白定量溶液 C 按 50：48：2 的比例混合得到到所需體積即可。如果需要 10 mL，則三種溶液體積分別為 5 mL、4.8 mL、0.2 mL，所得溶液即超敏 BCA 工作液。
4.取一塊 96 孔板，按下表加入上步新鮮制備的 BSA 工作液、N 個待測蛋白樣品和自備樣品緩沖液：
5.在每個孔中（總體積為 150 μL）加入等體積的超敏 BCA 工作液并混勻。如果用排槍加入并混勻則更好。也可把 96 孔板放在振蕩器上振蕩 30 秒混勻。
6.60℃放置 1 小時。本試劑受溫度和時間影響較大，故需要準確定時和定溫，以保證精確定量。
7.冷至室溫，迅速在 562 nm 下比色測定所有樣品的光吸收。如酶標儀沒有 562 nm的設定，可用接近的波長檢測，如 570 nm。測定操作最好在 10 分鐘內完成，否則化學反應還在繼續進行，光吸收值每 10 分鐘會升高 2.5%左右。
8.處理數據：將編號為 0 號的樣品（對照）的讀數從其余所有樣品（包括 0 號樣品， 其讀數變成零）中扣除。
9.制作標準曲線：以 0-7 號樣品的 BSA 含量（單位μg，見上表最右行）為橫坐標，
0-7 號樣品吸光值（扣除背景讀數的）為縱坐標，繪出BSA 的標準曲線。
10.再將 N 個待測樣品的吸光值（減去 0 號樣品的讀數后）標在標準曲線上，其在橫坐標上對應的蛋白含量（μg）就是待測樣品中的蛋白質含量，除以樣品稀釋液總體積（20 μL），乘以樣品稀釋倍數即為樣品實際濃度，單位為 μg/μL。
二：注意事項
11.第 5 步加 BCA 工作液后也可以在室溫放置 2 小時，或 60℃放置 30 分鐘。超敏BCA 法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。所以，如果蛋白質濃度較低，可以改在 60℃孵育 60 分鐘。
12.待測樣品濃度在 20～2000 μg/mL 范圍時有較好的線性關系。
13.超敏 BCA 法測定蛋白濃度時，不受下列化學物質的影響：
名稱濃度小于下面數值時不受影響
Ammonium Sulfate1.5 M
Brij-355.0%
CHAPS5.0%
EDTA10 mM
Hepes100 mM
Glycine, pH 2.8100 mM
Guanidine HCl4.0 M
Tween 20、60、805.0%
SDS5.0%
Sodium Acetate pH 5.5200 mM
Sodium Chloride (NaCl)1.0 M
Sucrose40%
Sodium Hydroxide (NaOH)0.1 M
NP-405.0%
Triton X-1005.0%
Urea3.0 M
選擇我們的蛋白濃度測定試劑盒（BCA 超敏法），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！
1
化工儀器網