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供貨周期 | 現貨 | 規格 | 50次 |
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貨號 | XY-D-1625 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | / |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 12個月 |
產品簡介:
某些 DNA 聚合酶具有不依賴于模板的末端轉移酶活性,在只有 dTTP 存在的情況下,可以在平末端的 DNA 片段的兩個 3’端各加上一個 dT 尾巴。本產品就是利用此原理開放的加 T 試劑盒,主要用于制備 T 載體或在平末端的 DNA 片段上加上 1 個 T 尾巴。
產品特點:
1.簡單, 2X 加 T 預混合液中含有所需要的所有成分(包括酶),不需要單獨準備。
2.各成分優良用量經過優化,用戶不需要單獨調試。
3.適用于任何平末端的 DNA 片段,包括 Pfu DNA 聚合酶等高保真 DNA 聚合酶合成的 DNA 片段或限制性內切酶酶切回收得到的 DNA 片段。
4.加 T 后的載體可以作為 T 載體使用。
產品參數:
產品規格
成分 | 規格 | 包裝 |
2X 加 T 預混液 | 1.25 mL | 2.0mL 本色管 |
使用手冊 | 1 份 | 無 |
保存和運輸
DNA 片段加T試劑盒低溫運輸,-20℃保存,保存期限為一年。
自備試劑
平末端 DNA 片段、平末端質粒 DNA、自備超純水。
使用方法:
一:反應前純化處理:
1.平末端 DNA 片段或平末端質粒 DNA 可以采取膠回收和酚/氯仿抽提法等常規方法純化,最后溶解在水或TE 中,終濃度以 0.1 ug/uL 為宜。必須注意的是, 用 Vent, Deep Vent, Pfu, Pwo 等具有 3 到 5 外切活性的 DNA 聚合酶擴增得到的 DNA 片段,必須經過徹-底的去除殘留的酶的處理過程(如酚/ 氯仿抽提或 Proteinase K 處理),否則它們將在加 T 反應時,將切除掉加上的 T 尾巴,干擾反應。
2.本產品的加尾酶在 DNA 的 3’末端的核苷酸為 T 時,加 T 效率更高,故如果有可能,最好滿足此要求。
二:加 T 反應
3.在干凈的0.5 mL或1.5 mL離心管中,分別加入回收的DNA 片段(0.2-2 ug)、 25 uL 2 X 加 T 緩沖液、最后補水到 50 uL,在 PCR 儀上 72℃保溫 2 小時。如果用金屬浴或水浴,必須加 50uL 石蠟油,否則水分在反應過程中將蒸發, 影響加尾效率。
4.加 T 反應后,加尾酶將與 DNA 末端緊密結合,所以必須酚/氯仿抽提去除。如果使用 Proteinase K 處理后再用酚/氯仿抽提效果會更好。得到的 DNA溶于適量水和 TE 中后即可用于后續連接反應。由于加一個 T 不會改變 DNA
片段的瓊脂糖電泳速度,故不能通過跑電泳檢測加尾效果。
選擇我們的DNA 片段加T試劑盒,就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!