目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> DNA 片段磷酸化試劑盒
供貨周期 | 現貨 | 規格 | 20次 |
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貨號 | XY-D-1666 | 應用領域 | 化工,生物產業 |
主要用途 | 科研 | 英文名稱 | / |
保存條件 | -20℃ | 有效期 | 12個月 |
產品簡介:
人工合成的 PCR 引物、linker 和 adaptor 的 5′端一般都是羥基基團而不是磷酸基團(除非額外付費要求在人工合成時加上磷酸基團),而任何 DNA 連接酶都不能將一個 DNA 分子 5′端的羥基基團和另一個 DNA 分子 3′端的羥基基團進行連接,因此通過人工合成的 DNA 片段和天然 DNA 之間的連接效率一般都比天然 DNA 彼此的連接效率低(天然 DNA 4 個端口均可連接,人工合成的 DNA 跟天然 DNA 有 2 個端口可以連接,人工合成的 DNA 之間沒有任何端口可以連接),尤其是在平末端連接時。本公司開發的 DNA 磷酸化產品能將 DNA 分子 5′端的羥基基團磷酸化。
產品特點:
1.可以快速把 DNA 5′端的羥基基團變成磷酸基團,使人工合成的 DNA(包括 PCR 產物)跟天然 DNA 一樣有高的連接效率。
2.既可以對單鏈 DNA 進行磷酸化處理,也可以對雙鏈 DNA 片段同時磷酸化處理。
3.處理后的 DNA 可以直接用于連接反應、克隆等,不需要純化。
4.本產品足夠 20 次 DNA 的磷酸化實驗。
5.DNA 片段磷酸化試劑盒只能用于科研。
產品參數:
產品規格
成份規格包裝材料
DNA 磷酸化 Mix40 μL0.5 mL 紅蓋管
ATP 溶液(10 mM)100 μL0.5 mL 白蓋管
超純水1 mL1.5 mL 藍蓋管
使用手冊1 份1 份
保存和運輸
低溫運輸,-20℃保存,有效期為一年。
自備試劑
引物、PCR 產物、DNA 片段
使用方法:
一:雙鏈 DNA 片段的磷酸化
注意:如果是 PCR 產物,一定要先膠回收,不能使用沒經過純化的 PCR 反應液,因為其中殘留的大量的 PCR 引物會耗掉大量的激酶,降低 PCR 產物的磷酸化效率。
1、在 1.5 mL 離心管中配制下列反應液(20 μL):
成分用量
PCR 膠回收片段2 μL(不超過 10 pmol)
DNA 磷酸化 Mix2 μL
ATP 溶液(10 mM)5 μL
加超純水到20 μL
2、37℃反應 30 分鐘。
3、70℃熱處理 5 分鐘滅活 T4 多核苷酸激酶。
4、可不經過純化直接用于后續克隆,但加入量不要超過連接反應總體積的 1/5。二:單鏈 DNA 片段的磷酸化
注:單鏈 DNA 包括局部雙鏈的 DNA、引物,linker,adaptor,Oligo 探針等。
5、在 1.5 mL 離心管中配制下列反應液(20 μL):
6、37℃反應 30 分鐘。
7、70℃熱處理 5 分鐘滅活 T4 多核苷酸激酶。
8、可不經過純化直接用于后續克隆,但加入量不要超過連接反應總體積的 1/5。如果需要提高磷酸化 DNA 的濃度,可用乙醇沉淀法濃縮 DNA(見附)。DNA 的濃度低于 5 pmol,在乙醇沉淀時還需要加入 DNA 助沉劑(需要另行購買)。沉淀得到的 DNA 可溶解在適量的水中以便得到所需的濃度。
附:乙醇沉淀濃縮 DNA(本試劑盒不提供相關試劑,下列操作流程僅供參考):
1、在 DNA 溶液中加入 0.1 倍體積的 3 M 乙酸鈉溶液(pH 5.2),100 μL DNA 溶液加 10 μL 乙酸鈉溶液。
2、再加入 2.5 倍體積的無水乙醇。100 μL DNA 溶液加 250 μL 無水乙醇。
3、混勻后 12,000×g 常溫離心 10 分鐘,小心棄上清。
4、加入 1 mL 70%乙醇,短暫離心 3 分鐘后小心棄上清。
5、短暫離心 5 秒,吸棄殘留液體(約 30-50 μL)。
6、室溫放置 2 分鐘干燥后加入適量的超純水溶解 DNA,立即使用或放-20℃長期保存。
選擇我們的DNA 片段磷酸化試劑盒,就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!