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產品簡介：

銀染是目前檢測 PAGE 膠蛋白質條帶的最-靈敏的方法，MS（質譜）是確定未知蛋白最-常用和最快-捷的方法，但將銀染得到的蛋白直接用于MS 分析有很多問題，其中最主要問題是常規銀染所使用的試劑（包括強氧化劑和醛類）容易使蛋白質發生共價化學修飾， MS 分析得到的修飾后的氨基酸信息跟蛋白質實際的沒有修飾的氨基酸信息并不相同。為了使銀染得到的蛋白質可以用于 MS 分析，為此本公司開發MS 兼容型銀染試劑盒。

產品特點：

1.跟 MS 兼容。整個過程不使用能對蛋白質進行化學修飾的試劑，所得蛋白質沒有發生化學修飾，故可直接用于后續的 MS（包括 MALDI-TOF-MS 和 ESI-MS）分析。

2.銀染的染色靈敏度比考馬斯亮藍染色高 100 倍左右，可達 0.2-0.6 ng 蛋白質/條帶。

3.可用于各種 PAGE 膠，包括變性 PAGE 膠（如 SDS-PAGE，尿素-PAGE），非變性 PAGE 膠，IEF 膠（等電電泳膠），2D 膠等。

4.四種溶液都是現用現配，實驗結果的可重復性好。

5.本試劑盒足夠染色 10 塊 10×10 cm PAGE 膠。

6.蛋白銀染試劑盒（質譜兼容型）只能用于科研。

產品參數：

產品規格

成份規格材料

銀染溶液A 組分一5 g10 mL 本色瓶

銀染溶液A 組分二100 mL125 mL 本色瓶

銀染溶液A 組分三22.5 g×1060 mL 本色瓶

銀染溶液 B 組分5 g10 mL 棕色瓶

銀染溶液 C 組分一5 g×1010 mL 本色瓶

銀染溶液 C 組分二2 mL5 mL 本色瓶

10×銀染溶液 D200 mL250 mL 本色瓶

使用手冊1 份1 份

保存和運輸

常溫運輸及保存，有效期一年。

自備試劑

MilliQ 水（或電導在 5M?以上的去離子水），分析純甲醇和分析純乙酸。

使用方法：

說明

所有溶液均需現配現用。以下操作是針對一塊 10×10 cm PAGE 膠需要 200 mL 各種溶液的比例配制，用戶可以根據自己 PAGE 膠的大小增減溶液的配制量。整個過程一定戴手

套操作，避免皮膚脫落角質蛋白對實驗的干擾。所用容器（如托盤）最好是干凈的玻璃容器。

一：配制 400 mL 固定液

1.將 160 mL 甲醇、40 mL 乙酸和 200 mL MilliQ 水充分混合后即得 400 mL 固定液，常溫放置待一次性使用。按一次銀染需要固定 2 次，每次需使用 200 mL 固定液。

二：配制 200 mL 銀染溶液 A

2.先配制銀染溶液 A 組分一母液：將銀染溶液 A 組分一干粉 5 g（本試劑盒提供）加入到裝有 100 mL 銀染溶液A 組分二的塑料瓶中，蓋緊蓋子后充分搖晃溶解即可。常溫放置待用。此溶液剩余的可 4℃長期保存。

3.將 60 mL 自備甲醇、8 mL 上步所得銀染溶液 A 組分一母液、1 瓶銀染溶液 A 組分三干粉（試劑盒提供）和 132 mL 自備的 MilliQ 水充分混合后即得 200 mL 銀染溶液 A。常溫放置待一次性使用。

三：配制 200 mL 銀染溶液 B

4.稱 0.5 g 銀染溶液B 干粉，溶于 200 mL 自備的 MilliQ 水中，充分混合后即得200 mL

銀染溶液 B。常溫放置待一次性使用。四：配制 200 mL 銀染溶液 C

5.將 1 份銀染溶液 C 干粉溶解在 200 mL 自備的 MilliQ 水（干粉不容易溶解，需充分

搖晃）即得銀染溶液 C（使用前還需要再加入 160 μL 溶液 C 組分二，但此時暫不加）。常溫放置待一次性使用。

五：銀染

6.PAGE 電泳（包括非變性 PAGE，SDS-PAGE，尿素-PAGE，2D-PAGE，IEF-PAGE 等）結束后，將PAGE 膠轉移到裝有 200 mL 固定液的瓷盤或玻璃盤中，搖晃 30 分鐘以去除干擾銀染的組分（如甘-氨酸、SDS、尿素、DTT、甘油等），倒掉固定液。注：此步非常重要，否則銀染背景會很高。

7.重復上步一次。

8.將 PAGE 膠轉移到 200 mL 新鮮配制的銀染溶液A 中，室溫搖晃 30 分鐘。

9.用 200 mL 自備的 MilliQ 水漂洗 3 次，每次 5 分鐘（不要延長或縮短）。

10.將 PAGE 膠轉移到 200 mL 的銀染溶液B 中，室溫搖晃 20 分鐘。

11.用 200 mL 自備的 MilliQ 水漂洗 2 次，每次 1 分鐘（不要延長或縮短）。

12.將 PAGE 膠轉移到 200 mL 的銀染溶液C 中（使用前還需要往裝有銀染溶液C 的瓶中再加入 160 μL 溶液 C 組分二并充分混勻），室溫搖晃直到蛋白電泳條帶顯現，此步一般需要 10 分鐘左右，具體時間取決于蛋白的濃度。

13.將 PAGE 膠轉移到 200 mL 的銀染溶液 D 中（配制方法：180 mL MilliQ 水中加入

20mL10×銀染溶液 D，混勻即可），室溫搖晃終止反應。

14.用 200 mL 自備的 MilliQ 水漂洗 3 次，每次 5 分鐘（不要延長或縮短）。

15.切下蛋白電泳條帶或膠塊進行后續的脫銀，原位 trypsin 酶解，多肽沉淀和 MS 分析（略）。

附MS 前處理步驟（僅供參考，本試劑盒不含相關試劑）

16.脫銀：將切下的銀染斑點或條帶用脫銀液（30 mM K3Fe（CN）3 和 100 mM Na2S2O3的 1：1 的混合液）處理直到黑色消失。

17.還原：將膠塊或膠條置于 10 mM DTT（溶劑為 50 mM NH4HCO3），56℃處理一小時。

18.烷化：將膠塊或膠條置于 55 mM 碘乙酰胺（溶劑為 50 mM NH4HCO3），室溫避光處理 45 分鐘。

19.原位 trypsin 酶解：將膠塊或膠條置于 10 ng/μL 測序級別的 trypsin 溶液中（溶劑為 25 mM NH4HCO3），37℃處理過夜。

20.多肽提取：用 5%三氟-乙酸抽提酶解液，再用 2.5%三氟-乙酸-50%ACN 混合液抽提酶解液，上清真空干燥，沉淀物（多肽）最后溶于 0.5%三氟-乙酸中。

21.MS 分析：參考相關MS 儀器使用手冊。

選擇我們的蛋白銀染試劑盒（質譜兼容型），就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案，為您的科研實驗保駕護航！