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產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

Folin 酚（福林酚）試劑（磷鉬酸和磷鎢酸混合物）跟蛋白質(zhì)中含酚氨基酸（色-氨酸和酪-氨酸）發(fā)生顏色反應(yīng)，可用于測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，但靈敏度較低。Lowry 在此基礎(chǔ)上加入 Biuret（雙縮脲）反應(yīng)步驟，即先在堿性條件下使蛋白質(zhì)和 Cu+形成復(fù)合物，再使其與 Folin 酚試劑發(fā)生顯色反應(yīng)，產(chǎn)物在 750nm 檢測(cè)。Lowry 法使不含酚的蛋白質(zhì)也能被檢測(cè)出來(lái)，靈敏度是單獨(dú)使用 Folin 酚的 10 倍左右，是雙縮脲反應(yīng)的 200 倍，因此成為早期檢測(cè)蛋白濃度的主要方法。Lowry 法檢測(cè)原理圖如下：

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1.即開(kāi)即用，不需要單獨(dú)購(gòu)買每個(gè)成分再配制。

2.能抵抗部分干擾物（如一定濃度 SDS 或其他去污劑）的干擾。

3.檢測(cè)線性范圍廣，在 2-100 ?g，檢測(cè)上限比經(jīng)典 Lowry 法高 30%-40%。

4.改良Lowry法蛋白定量試劑盒只能用于科研。

產(chǎn)品參數(shù)：

成分 規(guī)格包裝

改良Lowry 法蛋白定量溶液A1 208 mL250 mL 本色瓶

改良Lowry 法蛋白定量溶液A216 mL30 mL 本色瓶

改良Lowry 法蛋白定量溶液A3 16 mL30 mL 本色瓶

改良 Lowry 法蛋白定量溶液 B 80 mL125 mL 本色瓶

改良 Lowry 法蛋白定量溶液 C 80 mL125 mL 本色瓶

福林酚 10 mL10 mL 棕色瓶

BSA 標(biāo)準(zhǔn)品，2 mg/mL 1 mL1.5 mL 本色管

使用手冊(cè) 1 份無(wú)

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存，但 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品需要-20℃保存，有效期 12 個(gè)月。

自備試劑

去離子水，蛋白樣品，樣品緩沖液。

使用方法：

一、工作液的制備

1.制備溶液A：將16 mL改良Lowry 法蛋白定量溶液A2 和16 mL改良Lowry法蛋白定量溶液 A3 加入到裝改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A1 的塑料瓶中， 混合均勻得到 240 mL 改良 Lowry 法蛋白定量溶液溶液 A。

2.制備改良 Lowry 法蛋白定量工作液：將改良 Lowry 法蛋白定量溶液 A、改良 Lowry 法蛋白定量溶液 B 和改良 Lowry 法蛋白定量溶液 C 按 3：1：1 的體積比混合得到改良 Lowry 法蛋白定量工作液。此工作液可以室溫放置2-3 周，所以最好用多少配多少。如果發(fā)現(xiàn)改良 Lowry 法蛋白定量溶液 B 或改良 Lowry 法蛋白定量溶液 C 有沉淀，需 37℃溶解并搖勻后再使用。

3.制備福林酚工作液：在裝有 10 mL 福林酚的棕色塑料瓶中加入 90 mL 去離子水，搖晃混勻待用。此工作液在避光條件下可以放置 6 個(gè)月。

二、試管法

4.先用去離子水將 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品，2 mg/mL 稀釋到 50 ?g/mL，然后在標(biāo)記的試管中加入下列成分（單位：?L）。注意：每個(gè)樣品最好做三個(gè)稀釋度，

每個(gè)稀釋度最好設(shè)置三次重復(fù)，陰性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)品也最好做三次重復(fù)。

標(biāo)準(zhǔn)品（每個(gè)做三次重復(fù)，此處只列出一個(gè)）

編號(hào)BSA 標(biāo)準(zhǔn)，50 ?g/mL水總體積

陰性對(duì)照00200

10200200

225175200

350150200

4100100200

515050200

62000200

樣品（以 1 個(gè)樣品、3 個(gè)稀釋度為例，

每個(gè)稀釋度三個(gè)重復(fù)，此處只列出一個(gè)）

編號(hào)樣品總體積

1200（稀釋度 1）200

陰性對(duì)照 1200（用稀釋度 1 稀釋的溶解蛋白樣

品的緩沖液）200

2200（稀釋度 2）200

陰性對(duì)照 2200（用稀釋度 2 稀釋的溶解蛋白樣200

品的緩沖液）

3200（稀釋度 3）200

陰性對(duì)照 3200（用稀釋度 3 稀釋的溶解蛋白樣

品的緩沖液）

200

5.每管中加入 200 ?L 改良 Lowry 法蛋白定量工作液，振蕩混勻后室溫反應(yīng)10 分鐘。

6.每管中加入 100 ?L 福林酚工作液，振蕩混勻后室溫反應(yīng) 30 分鐘。

7.用容量為 0.5 mL、光徑為 1 cm 的玻璃比色杯或聚苯乙烯比色杯測(cè)定750nm 的光吸收。測(cè)定時(shí)，先空白（即陰性對(duì)照）后樣品，測(cè)定樣品和 BSA 標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，先低濃度后高濃度。測(cè)定未知樣品前需要將杯子清洗干凈，必要  時(shí)可以用甲醇清洗吸附到比色杯壁上的染料。

8.根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品三個(gè)重復(fù)的平均值繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)未知樣品的光吸收從  標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得其對(duì)應(yīng)的濃度。

三、96 微孔板法

9.同上，只是反應(yīng)用 96 微孔板設(shè)置，用酶標(biāo)測(cè)試儀 750 nm 測(cè)定光吸收。四、樣品中干擾物質(zhì)的去除

10.如果樣品中有干擾 Lowry 法蛋白定量的物質(zhì)，可用自備試劑按下法去除：

用水將樣品調(diào)到體積為 200 ?L,加入 20 ?L 的 0.15%去氧膽酸鈉，混勻，室溫放置 10 分鐘。加入 20 ?L 的 72%的 TCA，室溫放置 5 分鐘。3000 g 離心 15 分鐘，小心去除上清。用 200 ?L 水溶解蛋白沉淀后以用于 Lowry 法測(cè)定。

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