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目錄:上海烜雅生物科技有限公司>>分子生物學試劑>>試劑盒>> 痕量 DNA 滾環擴增試劑盒

痕量 DNA 滾環擴增試劑盒
  • 痕量 DNA 滾環擴增試劑盒
參考價 2990
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協議為準
2990
≥1
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 烜雅生物
  • 型號
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2025-05-20 08:04:34瀏覽次數:55評價

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供貨周期 現貨 規格 50次
貨號 XY-D-1820 應用領域 化工,生物產業
主要用途 科研 英文名稱 Minute DNA RCA Amplification Kit
保存條件 -20℃ 有效期 1年
痕量 DNA 滾環擴增試劑盒即開即用,十分簡單方便,用戶不需要辛苦摸索條件。本產品僅供科研。

產品簡介:

石蠟包埋切片 DNA 樣本、血液游離 DNA 樣本、法醫 DNA 樣本和考古 DNA 樣本都是非常重要的實驗材料,但是這些材料的 DNA 不但含量稀少,而且往往都高度降解,使用前都需要先進行擴增。目前進行擴增的方法很多,包括 PEP-PCR、DOP-PCR、MDA、SCOMP,balanced-PCR 等,但各有缺點,不盡人意。為此,本公司結合 DNA 環化技術和 RCA 滾環擴增技術,對痕量 DNA 進行擴增。其原理示意圖如下:



痕量 DNA 滾環擴增試劑盒


產品特點:

1.即開即用,十分簡單方便,用戶不需要辛苦摸索條件。

2.直接使用純化的線狀 dsDNA 為模板。本產品不包括純化試劑盒。如果 DNA 是古舊的有損傷的 DNA,需要使用另外的試劑盒(痕量古舊 DNA 修復及擴增試劑盒)。

3.最-低可以使用 5pg 的模板 DNA(一個人體細胞的 DNA 為 6pg),最后可以擴增上 1 千-1 萬倍(起始模板DNA 越少,擴增倍數越高)。

4.優化的反應體系,所有反應一管式完成,避免了珍貴痕量樣本的丟失。

5.使用高保真的phi29 DNA 聚合酶進行擴增,避免了在擴增過程中引入新突變。

6.擴增試劑含熒光染料,可以實時監測擴增反應過程,不需要跑電泳檢測,節約寶貴的擴增后樣品。

7.本產品足夠 50 次 20uL 體系的環化-擴增反應。

8.得到的 DNA 可以直接用于二代測序、酶切或qPCR 等后續實驗。

9.痕量 DNA 滾環擴增試劑盒只能用于科研。


產品參數:

成份規格包裝

10×DNA 環化-擴增緩沖液100 uL0.5mL 白蓋管

DNA 環化酶 A25 uL0.5mL 紅蓋管

DNA 環化酶B25 uL0.5mL 紅蓋管

RCA 專用隨機引物溶解液10 uL0.5mL 綠蓋管

RCA 專用隨機引物干粉50 次0.5mL 本色管

phi29 DNA 聚合酶,10U/uL50 uL0.5mL 紅蓋管

超純水1mL1mL1.5mL 藍蓋管

使用手冊1 份

運輸及保存

低溫運輸,-20℃保存,有效期為一年。

自備試劑

樣本 DNA 純化試劑盒、DNA 片段回收試劑盒(從 RCA 反應體系中回收擴增產物)


使用方法:

一、DNA 環化

1.首-次使用本試劑盒時,需要在 RCA 專用隨機引物溶解液化凍后,將 110uL 全部加入到 RCA 專用隨機引物干粉管中,渦旋震蕩半分鐘溶解,短暫離心,得 RCA 專用隨機引物。放冰上待用。沒用完的需要放-20℃長期保存。

2.按下表在 200uL 的PCR 管中設置和進行 DNA 環化-擴增反應:

成分管 1(樣本)管 2

(無模板對照)

自備模板 DNA(5pg-100ng)1-8.5 uL不加

10×DNA 環化-擴增緩沖液1 uL1 uL

超純水加到 9.5 uL加到 9.5 uL

DNA 環化酶 A0.5 uL0.5 uL

合計10 uL10 uL

在 PCR 儀器上 37℃ 2 小時,65℃ 20 分鐘滅活酶

超純水4.0 uL4.0 uL

10×DNA 環化-擴增緩沖液0.5 uL0.5 uL

DNA 環化酶 B0.5 uL0.5 uL

合計15 uL15 uL

室溫放置 2 小時,65℃ 10 分鐘滅活酶

 

超純水1.5 uL1.5 uL

10×DNA 環化-擴增緩沖液0.5 uL0.5 uL

RCA 專用隨機引物溶液2 uL2 uL

合計19 uL19 uL

放在PCR 儀器上,設置 95℃加熱 5 小時,自然冷卻到室溫。

再加入下列成分

phi29 DNA 聚合酶,10U/uL1 uL1 uL

混勻后放熒光定量PCR 儀器上,設置 30℃保溫 16 小時,每 10 分鐘

設置成一個循環,每個循環采集一次 SYBR 通道的熒光信號。

二、數據分析

3.由于是可以實時檢測RCA 擴增反應,所以RCA 擴增反應不一定進行 16 小時, 可以在擴增熒光信號的曲線進入平臺期(已經沒有新的 DNA 合成)后結束。因為 phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性,在擴增反應耗盡 dNTP 后,它可能會進入酶切模式,逐漸降解已經合成的 DNA。

4.65℃保溫 10 分鐘滅活酶。由于 phi29 DNA 聚合酶有很強的 3-5 外切酶活性, 因此必須滅活,否則它將逐漸降解反應管中已經合成的 DNA。

5.典型實驗結果。有擴增的樣本將有平緩的 S 熒光曲線,無模板對照將沒有此擴增曲線(見下圖):

 

6.如果沒有熒光定量 PCR 儀器,則只能電泳檢測或PCR 檢測是否有擴增。

7.擴增所得 DNA 可以用于后續實驗,如 qPCR 擴增。如果后續實驗需要純化去除dNTP(如通過測 OD 確定濃度)或去除 RCA 專用隨機引物,則需要自備試劑盒進行純化處理。

選擇我們的痕量 DNA 滾環擴增試劑盒,就是選擇精準、高效、可靠的檢測方案,為您的科研實驗保駕護航!

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